甘草、桔?！八帉Α彼幮W(xué)環(huán)節(jié)之配伍機(jī)理研究（Ⅱ）.pdf

1、中藥復(fù)方配伍規(guī)律研究，是目前亟待解決的技術(shù)難題，從復(fù)方最小單位“藥對”入手研究配伍規(guī)律，符合從易到難的研究思路，是復(fù)方研究的基礎(chǔ)所在。本課題以仲景名方“桔梗湯”(后世多稱為“甘桔湯”)主要物質(zhì)基礎(chǔ)——甘草皂苷和桔梗皂苷為具體研究對象，以兩者共同藥效——抗炎作用為主要考查指標(biāo)，祛痰作用為輔助，圍繞兩者合用的毒性變化、藥效維持時間以及藥效強(qiáng)度展開，采用幾種國內(nèi)外成熟的藥物相互作用評價方法—金氏Q值法、改良的等高線法以及中效法，配合已開發(fā)的相

2、應(yīng)軟件，對兩者合并使用結(jié)果的性質(zhì)進(jìn)行評價，以期達(dá)到以下目的：一則通過合用性質(zhì)定量化，從而揭示甘草皂苷與桔梗皂苷合用的內(nèi)在聯(lián)系，闡明配伍優(yōu)于單方的內(nèi)在原因，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)的用藥依據(jù)；二則尋找到適合中藥部位合用研究的設(shè)計(jì)和評價方法，并探索中藥“藥對”配伍規(guī)律的研究思路與方法，為進(jìn)一步研究中藥復(fù)方提供可能。 研究結(jié)果如下：1毒性拮抗研究動物預(yù)先給予一定劑量甘草皂苷(我們稱其為“甘草化”過程)，可明顯降低給予致死量桔梗皂苷后動物的死

3、亡率(死亡率曲線明顯右移)，桔梗皂苷LD50顯著提高。提示，中藥解毒研究應(yīng)當(dāng)采用適合中藥臨床用藥特點(diǎn)的新方法。 2時間協(xié)同研究小鼠氣管酚紅排泌、二甲苯致耳腫脹以及PLA2致足跖腫脹模型中，甘草皂苷與桔梗皂苷合用可明顯延長藥效持續(xù)時間，體現(xiàn)“時間協(xié)同”特點(diǎn)。金氏Q值法評價“時間協(xié)同”出現(xiàn)時間點(diǎn)的合用性質(zhì)，顯示出協(xié)同或相加的結(jié)果。 3強(qiáng)度協(xié)同研究3.1體內(nèi)研究甘草皂苷、桔梗皂苷以及兩者合用在一定劑量范圍內(nèi)皆能抑制PLA2所致

4、的小鼠足跖腫脹，并呈劑量依賴關(guān)系。采用金氏Q值、改良的等高線法以及中效法對結(jié)果進(jìn)行評價，可以得出，三種方法的評價結(jié)果趨勢相同，隨著劑量增加，合用效果由相加轉(zhuǎn)為拮抗，但在不同效應(yīng)點(diǎn)下卻有出入，改良等高線法和中效法在有效劑量范圍內(nèi)始終表現(xiàn)為相加作用。 3.2體外研究甘草皂苷、桔梗皂苷以及兩者合用皆能抑制LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生NO，提示為兩者抗炎機(jī)制之一。因桔梗皂苷抑制作用無規(guī)律量效關(guān)系可循，所以采用“點(diǎn)對線”研究思路，

5、固定桔梗皂苷劑量，與不同劑量甘草皂苷合用。金氏Q值法評價結(jié)果顯示為，隨著劑量增加，從協(xié)同轉(zhuǎn)入相加。 為闡明甘草皂苷和桔梗皂苷可能的抗炎機(jī)制，我們建立了一種準(zhǔn)確、價廉、可操作性強(qiáng)的體外PLA2抑制劑篩選方法。甘草皂苷、桔梗皂苷以及合用皆可從體外抑制PLA2活性，并顯示出劑量依賴關(guān)系，由于桔梗皂苷線性范圍狹窄，我們還獲取了桔梗皂苷精制物的量效曲線。金氏Q值法、改良的等高線法評價無固定配比的甘草皂苷與桔梗皂苷合用性質(zhì)，結(jié)果一致，表現(xiàn)為

6、協(xié)同；金氏Q值法、改良的等高線法和中效法對固定配比的甘草皂苷與桔梗皂苷精制物合用進(jìn)行評價，金氏Q值法、改良的等高線法結(jié)果皆表現(xiàn)為相加，而中效法則表現(xiàn)為，隨著效應(yīng)增加，從相加(效應(yīng)＜30％)轉(zhuǎn)入拮抗。 甘草皂苷和桔梗皂苷能夠顯著抑制LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生PGE2，以及減少COX-2的生成，但對COX-2生成后的活性影響較小，提示，甘草皂苷與桔梗皂苷抗炎的機(jī)制與其抑制COX-2生成從而減少PGE2產(chǎn)生有關(guān)。該節(jié)采用“點(diǎn)

7、對線”思路，應(yīng)用金氏Q值法對PGE2和COX-2生成結(jié)果進(jìn)行評價，顯示，僅在500μg/ml甘草皂苷與0.5μg/ml桔梗皂苷的合用時表現(xiàn)為相加作用，其余劑量表現(xiàn)出拮抗。 結(jié)論“藥對”藥效的最大發(fā)揮與劑量有關(guān)，與配伍比例有關(guān)，與作用環(huán)節(jié)，尤其是機(jī)制環(huán)節(jié)上發(fā)生的相互作用有關(guān)。中藥復(fù)方是各藥味相互作用優(yōu)化的結(jié)果，綜合毒性拮抗、時間協(xié)同以及強(qiáng)度協(xié)同結(jié)果，為達(dá)到三方面的協(xié)調(diào)統(tǒng)一，尤其是在減少毒性的前提下，合用評價“相加”的結(jié)果揭示了配伍