siRNA介導(dǎo)的Gaveoin-1基因沉默對于FBJ-S1細胞的影響以及關(guān)于Gdla結(jié)合分子的研究.pdf

1、窖蛋白-1(Caveolin-1)是胞膜窖的一種基本結(jié)構(gòu)成分，通常被認為是一種腫瘤抑制蛋白。胞膜窖與絲裂信號，腫瘤的生成以及轉(zhuǎn)移都具有一定的聯(lián)系。研究表明神經(jīng)節(jié)苷脂GDla可抑制小鼠骨肉瘤細胞系FBJ細胞的轉(zhuǎn)移，并可誘導(dǎo)Caveolin-l的表達，為研究Caveolin-1在GD1a調(diào)控細胞轉(zhuǎn)移的信號通路中的作用，我們使用siRNA技術(shù)在Caveolin-1表達量較高但轉(zhuǎn)移性較差的FBJ-S1細胞中特異性的抑制Caveolin-1的表達

2、。RT-PCR以及免疫印跡實驗結(jié)果表明，在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Caveolin-1 siRNA的單克隆細胞中，siRNA對于Caveolin-1基因表達以及蛋白質(zhì)合成最大抑制效果可達80％。創(chuàng)傷治愈（劃痕恢復(fù)）實驗結(jié)果顯示，Caveolin-1表達量的降低可提高細胞的移動能力。通過WST法測定細胞存活度發(fā)現(xiàn)，正常培養(yǎng)條件下，Caveolin-1表達量的下調(diào)并未影響細胞增殖。但在無血清條件下，與對照細胞，Caveolin-1 siRNA轉(zhuǎn)染的細胞存活

3、率較高。使用二維電泳結(jié)合免疫印跡法對于去污劑不溶性成分(DIF)進行分離并分析發(fā)現(xiàn)，Caveolin-1 siRNA轉(zhuǎn)染的細胞的DIF中，絲氨酸蛋白磷酸化明顯增強，說明可能有細胞信號被誘發(fā)。通過對轉(zhuǎn)然后細胞內(nèi)其他一些分子基因表達水平的檢測，發(fā)現(xiàn)Caveolin-1表達量下降后，肝細胞生長因子的表達顯著升高，肝細胞生長因子是一種多功能的細胞因子，可誘導(dǎo)細胞移動，彌散并可提高腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。而在轉(zhuǎn)染Caveolin-1 siRNA的細