siRNA介導(dǎo)BMPR-Ⅱ基因沉默對人肝癌HepG2細胞增殖和侵襲的影響.pdf

1、背景與目的:
　　原發(fā)性肝細胞癌是我國常見的惡性腫瘤之一，近期研究發(fā)現(xiàn)骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic proteins，BMPs)信號通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究采用RNA干擾技術(shù)(RNA interference，RNAi)抑制骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體Ⅱ(bone morphogenetic protein receptor，BMPR-Ⅱ)表達，觀察抑制效果及抑制BMPR-Ⅱ表達后對人肝癌HepG2

2、細胞增殖和侵襲的影響。
　　方法:
　　設(shè)計并化學(xué)合成針對BMPR-Ⅱ的3對小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)，陽離子脂質(zhì)體法瞬間轉(zhuǎn)染HepG2細胞。采用離體培養(yǎng)肝癌HepG2細胞，并設(shè)正常對照組、空白對照組、陰性siRNA組及siRNA-BMPR-Ⅱ-a、siRNA-BMPR-Ⅱ-b、siRNA-BMPR-Ⅱ-c轉(zhuǎn)染組。各組培養(yǎng)48 h后，運用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和W

3、estern blot法檢測HepG2細胞中BMPR-Ⅱ在mRNA和蛋白水平表達的變化，MTT比色法及Transwell侵襲實驗檢測轉(zhuǎn)染后細胞增殖及侵襲能力的變化。
　　結(jié)果:
　　RT-PCR、Western blot顯示3對特異性siRNA-BMPR-Ⅱ轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染48h后，其BMPR-Ⅱ的mRNA和蛋白表達與另三組比較受到明顯抑制，以siRNA-BMPR-Ⅱ-a抑制效果最明顯(0.70±0.06、0.45±0.10，P＜

4、0.05)。MTT比色法及Transwell侵襲實驗顯示，轉(zhuǎn)染48 h后，siRNA-BMPR-Ⅱ-a轉(zhuǎn)染組HepG2細胞的生長及穿膜數(shù)(48.27％±0.76％、25.20±1.60,P＜0.05)明顯低于正常對照組(82.64％±0.67％、60.40±1.39)及陰性對照組(81.21％±0.80％、59.50±1.85)。
　　結(jié)論:
　　siRNA干擾介導(dǎo)BMPR-Ⅱ基因沉默可抑制人肝癌HepG2細胞的增殖和侵襲能