人臍帶血移植NOD-SCID小鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 摸索臍血來源的造血干細(xì)胞植入NOD/SCID小鼠達(dá)到高水平人源化所需要的條件。探討植入后人的基因能否在NOD/SCID小鼠中表達(dá)并長期穩(wěn)定的存在。期待利用該條件建立某些基因缺陷疾病的動(dòng)物模型。 方法: 實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)階段進(jìn)行。第一步，比較予400cGy單次照射和400cGy分割照射移植后小鼠的生存情況。選擇最佳照射方式作為第二階段實(shí)驗(yàn)的照射的依據(jù)。第二步，分選臍血(CB)單個(gè)核細(xì)胞(MNC)2×108/ml

2、，加入rHuSCF 100 ng/ml，照射后8小時(shí)內(nèi)通過尾靜脈植入小鼠。移植后+7至+14天皮下注射rhG-CSF注射液0.1ml(0.1ug/天)。監(jiān)測(cè)小鼠外周血的白細(xì)胞的動(dòng)態(tài)計(jì)數(shù)了解植入的情況。用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)小鼠外周血中CD45+抗原的動(dòng)態(tài)表達(dá)，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)了解人Cart-1基因的表達(dá)情況。 結(jié)果:生存分析表明400cGy分割照射比單次照射移植的存活率高。移植后4-6周小鼠的外周血白細(xì)胞緩慢恢復(fù)，6周時(shí)基本達(dá)

3、到照射前的水平(median： 1.40×109/L)。移植后4-16周經(jīng)流式細(xì)胞儀的監(jiān)測(cè)小鼠外周血CD45+抗原的表達(dá)情況，提示：4周始出現(xiàn)表達(dá)(7.5％-22％)，8周達(dá)到高水平的表達(dá)(66％-82％)， 16周仍有較高的表達(dá)量(23.1％-60.3％)。10周時(shí)所有存活的小鼠經(jīng)PCR均檢測(cè)到人Cart-1基因的表達(dá)。 結(jié)論:400cGv分割照射為適合本研究的最佳照射方式，其有助于造血干細(xì)胞的植入，并減少照射對(duì)正常組織的損傷