羥基紅花黃色素A對(duì)脂多糖作用后血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)型一氧化氮合酶等炎性介質(zhì)表達(dá)的影響.pdf

1、本課題旨在探討HSYA對(duì)LPS處理后HUVECs細(xì)胞株TNFα、IL-6、IL-8、iNOS等相關(guān)炎癥因子表達(dá)的影響。本實(shí)驗(yàn)可分成兩個(gè)部分：
　　 第一部分不同濃度LPS及1 mg/L LPS+1 mM/L HSYA處理HUVECs細(xì)胞株后相關(guān)炎癥介質(zhì)轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的變化。
　　 方法：采用不同濃度的LPS（0.01 mg/L、0.1 mg/L和1 mg/L）處理HUVECs24 h后，用RT-PCR方法檢測(cè)TNFα、IL

2、-6、IL-8、iNOS的mRNA表達(dá)變化；然后用1 mg/L LPS+1 mM/L HSYA處理HUVECs細(xì)胞株，HUVECs細(xì)胞加入1 mM/L的HSYA處理2 h后，再加入1 mg/L LPS濃度處理24 h，用RT-PCR檢測(cè)TNFα、IL-6、iNOS mRNA表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：隨著LPS濃度增高，IL-8表達(dá)量無(wú)明顯變化，而TNFα、IL-6及iNOS表達(dá)量增高；當(dāng)LPS濃度為1 mg/L時(shí)，TNFα、IL-

3、6及iNOS mRNA的表達(dá)具有明顯差異。1 mg/L LPS+1 mM/L HSYA細(xì)胞組TNFα、IL-6 mRNA表達(dá)量與1 mg/L LPS細(xì)胞組無(wú)明顯變化，而iNOS mRNA表達(dá)量降低。
　　 結(jié)論：成功培養(yǎng)HUVECs細(xì)胞株，生長(zhǎng)良好；用1mg/L LPS成功建立血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型；并成功篩選出iNOS因子深入研究HSYA對(duì)其表達(dá)的影響。
　　 第二部分主要深入探討HSYA對(duì)LPS作用后HUVECs誘導(dǎo)型

4、一氧化氮合酶表達(dá)的影響。
　　 方法：分別用0.01 mM/L、0.1 mM/L、和1 mM/L的HSYA孵育HUVECs2h后再加入1 mg/L的LPS處理24h，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，硝基還原酶法檢測(cè)培養(yǎng)液中一氧化氮（NO）含量，RT-PCR及Western blotting檢測(cè)iNOS mRNA及蛋白水平的表達(dá)。
　　 結(jié)果：與空白對(duì)照組相比，0.01 mM/L、0.1 mM/L HSYA對(duì)LPS引起的iNO