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1、目的：篩選人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC)中瞬時(shí)感受器電位（ transient receptor potential,TRP）亞型通道，檢測(cè)該亞型通道在機(jī)械牽張刺激中對(duì)一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表達(dá)的影響及探討相關(guān)機(jī)制。
方法： qRT-PCR、Western blot及細(xì)胞免疫熒光篩選HBMEC上TRP通道亞型。根據(jù)篩選的TRP通道亞
2、型將細(xì)胞分組，應(yīng)用多功能小型生物撞擊機(jī)給予機(jī)械牽張刺激；流式細(xì)胞儀檢測(cè)機(jī)械牽張前后細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度的變化；Western blot檢測(cè)一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表達(dá)情況。
結(jié)果：qRT-PCR結(jié)果表明，TRPV4及TRPC1的mRNA相對(duì)表達(dá)量較多；細(xì)胞免疫熒光及Western Blot顯示TRPV4通道蛋白表達(dá)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，特異性TRPV4通道抑制組較單純牽張組Ca2+濃度低，具有明顯差異（P=0.00
3、0），較未牽張組（P=0.072）、非特異性TRP通道抑制組（P=0.308）無(wú)明顯差異（P＞0.05）。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示， TRPV4通道抑制組（ P=0.002）和一氧化氮合酶抑制（N-nitro-l-arginine methyl ester，L-NAME）組（P=0.000）eNOS蛋白表達(dá)水平較單純牽張組細(xì)胞明顯降低（P＜0.05），較未牽張組（P=0.575， P=1.000，P＞0.05）無(wú)明顯差異（P
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