銀杏葉提取物對誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在內(nèi)皮細胞表達的抑制作用.pdf

1、目的：探討銀杏葉提取物對誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的抑制作用及對血管內(nèi)皮細胞保護作用的機制。
　　材料與方法：體外培養(yǎng)人內(nèi)皮細胞 ECV304細胞，應(yīng)用RPMI-1640培養(yǎng)液，分別培養(yǎng)加入不同濃度的銀杏葉提取物的細胞和空白組細胞。在培養(yǎng)細胞2小時和4小時后，分別測定一氧化氮代謝產(chǎn)物的量；通過免疫印跡分析NOS蛋白的表達；運用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）分析mRNA水平。
　　結(jié)果：(1)銀杏葉提取物對內(nèi)皮細胞的作用不依賴于細

2、胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。經(jīng)過銀杏葉提取物預(yù)處理的細胞，培養(yǎng)2小時后，對人內(nèi)皮細胞釋放 NO代謝物的量無明顯影響。經(jīng)過銀杏葉提取物處理的細胞孵育后4小時，NO代謝產(chǎn)物釋放到培養(yǎng)基中的數(shù)量顯著減少。通過各種濃度的銀杏葉提取物孵育的細胞4小時，并測定NO釋放到培養(yǎng)基的量。銀杏葉提取物抑制內(nèi)皮細胞NO代謝產(chǎn)物的釋放呈濃度依賴性的關(guān)系。在培養(yǎng)基中加入的鈣離子載體沒有改變銀杏葉提取物對血管內(nèi)皮細胞釋放一氧化氮的抑制作用。(2)在銀杏葉提取物處理的細胞

3、中NOS活性降低可能由于酶蛋白的降低。在Western blotting結(jié)果顯示，經(jīng)過50μg/ml和100μg/ml銀杏葉提取物處理的細胞中的iNOS蛋白水平分別降低27％和43%。(3)經(jīng)銀杏葉提取物處理過的細胞iNOS蛋白水平降低可能是由于mRNA表達受到影響。經(jīng)過銀杏葉提取物處理過的細胞，與對照比相比，iNOS與β-actin比值從0.22分別降低到0.16和0.14.具有統(tǒng)計學(xué)意義.
　　結(jié)論：
　　1.銀杏葉提取