誘導(dǎo)型一氧化氮合酶抑制劑合成與抑制效果的實驗研究.pdf

1、目的敗血性休克時頑固性血壓下降、血管對縮血管物質(zhì)的低反應(yīng)性等原因，導(dǎo)致敗血癥休克的死亡率高達35％-50％。研究已經(jīng)證明：敗血癥休克時，iNOS大量表達，生成過量的NO在病情的發(fā)生發(fā)展過程中，起著重要的作用。而抑制iNOS產(chǎn)生，減少NO水平可以改善血流狀態(tài)，減輕組織的病理損害，增強心血管系統(tǒng)對于β受體激動劑的反應(yīng)性，從而提高敗血癥休克的生存率。因此特異選擇性好、活性強的iNOS抑制劑有著良好的治療前景。本實驗合成新的高效特異的iNOS抑

2、制劑硝基精氨酸—賴氨酸三肽。在體外實驗中研究其對NO產(chǎn)生、eNOS和iNOS活性影響及其作用機制；在狗的敗血性休克模型上觀察此新合成化合物的升壓作用。 方法1.用液相合成法合成由左旋精氨酸、左旋賴氨酸組成的小分子三肽。2.給予人單核細胞PMA刺激使之轉(zhuǎn)化為巨噬細胞，用內(nèi)毒素刺激巨噬細胞誘導(dǎo)iNOS的表達，檢測三肽對NO的產(chǎn)生、iNOS活性、iNOS蛋白表達的影響。以及不同濃度三肽對于NO產(chǎn)生的影響。 3.原代培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)

3、皮細胞，以胰島素增強eNOS的表達，檢測三肽對內(nèi)皮細胞NO產(chǎn)生、eNOS活性的影響。 4.用靜脈注射大腸桿菌0111：B4菌液法建立狗敗血癥休克模型，檢測三肽對敗血癥休克動物的血壓及血清中NO的影響。 結(jié)果1.以液相合成法合成硝基精氨酸—賴氨酸三肽，其分子式如下HCl·Arg(NO2)-Lys(OCH3)-Arg(NO2)·HCl(MW=635)，三肽在水中的性質(zhì)穩(wěn)定。 2.內(nèi)毒素刺激巨噬細胞可以明顯增加NO的產(chǎn)

4、生，同對照組相比，給予等濃度(10-4mol/L)的三肽(P＜0.01)和L-NNA(P＜0.05)均可以抑制NO的產(chǎn)生，而三肽的抑制作用明顯強于L-NNA的作用(P＜0.05). 3.在1×10-4mol/L、2.5×10-4mol/L、5.0×10-4mol/L、7.5×10-4mol/L濃度組中，三肽對NO的抑制作用隨著濃度的增加不斷增強且具有統(tǒng)計學(xué)意義，而7.5×10-4mol/L、10.0×10-4mol/L兩組，雖然

5、三肽可以繼續(xù)增強其對NO產(chǎn)生的抑制作用，但無統(tǒng)計學(xué)意義。 4.同對照組相比，三肽(P＜0.01)和L-NNA(P＜0.05)均可以明顯抑制iNOS的活性，三肽比L-NNA具有更強的iNOS活性抑制作用(P＜0.05)。而L-NNA也同時明顯抑制cNOS活性(P＜0.05)。三肽對于cNOS活性的抑制作用，同L-NNA相比明顯減輕(P＜0.05)，同對照組相比雖然也抑制cNOS活性，但無統(tǒng)計學(xué)意義。 5.三肽和L-NNA對

6、于iNOS的蛋白表達無明顯影響。 6.同對照組和三肽組相比，L-NNA可以明顯減少臍靜脈內(nèi)皮細胞NO的產(chǎn)生(P＜0.05)、抑制eNOS的活性(P＜0.05)。而三肽同對照組比較，也可以減少臍靜脈內(nèi)皮細胞NO的產(chǎn)生和eNOS的和活性，但無統(tǒng)計學(xué)意義。 7.靜脈注射大腸桿菌菌液成功制造敗血癥休克動物的模型。靜脈注射菌液5小時后，動物血壓明顯降低，血清中NO濃度明顯升高，同對照組相比，0.01mmol/kg的三肽(P＜0.0

7、1)和L-NNA(P＜0.05)均可以明顯降低敗血癥休克犬血清的NO，而三肽的作用較L-NNA更明顯(P＜0.05)。 8.同對照組相比，三肽和L-NNA均可以升高敗血性休克犬的血壓。且三肽對于血壓影響作用較L-NNA更明顯。 結(jié)論1.三肽可以明顯抑制NO的合成。 2.其作用機制是通過抑制iNOS的活性而不是iNOS的蛋白表達，從而抑制NO的產(chǎn)生，其作用呈劑量依賴性。 3.三肽對于cNOS及eNOS活性抑