重組弓形蟲TRXL蛋白和ENO2蛋白免疫保護(hù)力的評(píng)價(jià).pdf

1、弓形蟲病是由剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）引起的一種危害嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病，呈世界性分布。弓形蟲是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲，可感染大部分哺乳動(dòng)物和鳥類。對(duì)于免疫抑制或免疫功能缺陷者，患弓形蟲病可能會(huì)造成生命威脅。孕婦感染后可造成流產(chǎn)、死胎，或胎兒出生后先天性缺陷。動(dòng)物弓形蟲病給畜牧業(yè)造成極大的損失，并可引起嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。因此，弓形蟲病的研究對(duì)于保障人類公共安全和畜牧業(yè)健康發(fā)展具有十分重要的意義。
　　為研

2、究剛地弓形蟲硫氧還蛋白樣蛋白(thioredoxin like，TRXL)和烯醇酶2蛋白(Enolase2，ENO2)的生物學(xué)特性及其作為抗弓形蟲疫苗的候選抗原的潛力，本研究針對(duì)TRXL和ENO2基因序列分別設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，通過(guò)RT-PCR法擴(kuò)增了弓形蟲GJS株TRXL和 ENO2基因，連接至pET-30a(+)原核表達(dá)載體。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后，分析rTRXL和rENO2蛋白的反應(yīng)原性。結(jié)果顯示，弓形蟲TRXL基因全長(zhǎng)1275bp

3、，共編碼424個(gè)氨基酸，與GenBank中下載的弓形蟲ME49株TRXL參考序列的核苷酸序列完全一致。SDS-PAGE分析表明，誘導(dǎo)表達(dá)的rTRXL大小約48 kD，與預(yù)期大小相符，主要以包涵體形式存在。弓形蟲ENO2基因全長(zhǎng)全長(zhǎng)1335 bp，可編碼444個(gè)氨基酸，與GenBank中下載的弓形蟲ME49株ENO2核酸序列的一致性為99.9％。SDS-PAGE分析表明，誘導(dǎo)表達(dá)的rENO2大小約49 kD，與預(yù)期大小相符，主要以可溶蛋白

4、形式存在。Western Blotting結(jié)果顯示，重組蛋白rTRXL和重組蛋白rENO2均能被感染弓形蟲的豬陽(yáng)性血清識(shí)別，具有良好的反應(yīng)原性。
　　進(jìn)一步將TRXL基因和ENO2基因大量原核表達(dá)并純化，以弗氏佐劑為佐劑，分別應(yīng)用rTRXL，rENO2重組蛋白及二者的混合蛋白rTRXL+rENO2制成蛋白疫苗免疫小鼠。三個(gè)蛋白疫苗均可刺激小鼠機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫應(yīng)答反應(yīng)和一定抗弓形蟲急性感染效果，說(shuō)明三個(gè)抗原具有良好的免疫原性和部分