熱淋清顆粒的體內(nèi)代謝動力學(xué)研究.pdf

1、“熱淋清顆?！睘閷γ谀蛳到y(tǒng)有獨(dú)特療效的苗藥單方制劑,70年代經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)生產(chǎn)并列入貴州省地方標(biāo)準(zhǔn)(黔 D/WS-299-89),1998年收載于中華人民共和國中藥成方制劑,2002年進(jìn)入國家基本藥物目錄,2004年進(jìn)入國家基本醫(yī)療保險目錄,已被遴選為國家中藥保護(hù)品種、國家社保藥物,并為唯一進(jìn)入2010版《中國藥典》的苗藥,獲國家發(fā)改委單獨(dú)定價權(quán)。其在2010版《中國藥典》中記載的功能主治為:清熱瀉火,利尿通淋,用于下焦?jié)駸崴碌臒崃?證

2、見尿頻、尿急、尿痛;尿路感染、腎盂腎炎見上述證候者。經(jīng)過多年的應(yīng)用,熱淋清顆粒以其穩(wěn)定的療效、較高的安全性、可靠的質(zhì)量得到廣大醫(yī)生和患者的好評,享有很好的聲譽(yù)。
　　然而,熱淋清顆粒用于治療泌尿系統(tǒng)感染、腎盂腎炎、膀胱炎、尿路結(jié)石等疾病的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確,對其作用機(jī)制、生物轉(zhuǎn)化和體內(nèi)代謝過程的研究無的放矢。研究發(fā)現(xiàn)熱淋清顆粒及其原料藥材(頭花蓼藥材)富含酚酸類、黃酮類化合物,具有良好的抗氧化、抗炎、抗病毒、殺菌等生物活性作用。但

3、熱淋清顆粒中所含酚酸類、黃酮類化合物是否為其吸收入血并參與血液循環(huán)的“有效成分”,是否為其發(fā)生藥效的“物質(zhì)基礎(chǔ)”尚不清楚。因而開展口服熱淋清顆粒后含藥血清中的移行成分分析,對其入血成分的吸收、分布、代謝及排泄特征進(jìn)行系統(tǒng)闡明,確定其在體內(nèi)的變化過程,研究其藥效相關(guān)性,具有重要意義。
　　沒食子酸(Gallic Acid,GA)和原兒茶酸(Protocatechuic Acid,PCA)為熱淋清顆粒中的含量較大的成分,2010版《中

4、國藥典》中更是以GA的含量為指標(biāo)來控制熱淋清顆粒的質(zhì)量(不少于23.0 mg每袋),且研究表明 GA和 PCA的單體成分均可被吸收入血,通過參與血液循環(huán)發(fā)生作用。因此本研究以 GA和 PCA為指標(biāo),探究了口服熱淋清顆粒后,GA和 PCA在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)過程,為熱淋清顆粒作用機(jī)制的闡明提供科學(xué)數(shù)據(jù)。研究如下:
　　一、口服熱淋清顆粒后 GA和 PCA血漿藥代動力學(xué)研究
　　本研究建立了靈敏、快速、高特異性的同時測定大鼠血

5、漿中 GA、PCA兩種活性成分的 LC-MS/MS方法,血漿樣品經(jīng)蛋白沉淀、離心后,上清液經(jīng)Phenomenex C18色譜柱分離進(jìn)行質(zhì)譜測定,質(zhì)譜儀為三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜,ESI離子源,負(fù)離子掃描,多反應(yīng)監(jiān)測(Multiple reaction monitoring(MRM))模式檢測GA、PCA和巖白菜素內(nèi)標(biāo)(internal standard, IS)用于定量分析的離子對分別為169.181→125.268(GA)、152.918→

6、109.244(PCA)和326.922→192.167(IS)。對該定量分析方法進(jìn)行了系統(tǒng)完整的方法學(xué)驗證,對 LLOQ、線性、專屬性、精密度、準(zhǔn)確度、回收率、穩(wěn)定性等進(jìn)行了考察,結(jié)果顯示各項指標(biāo)均符合生物樣品分析方法指導(dǎo)原則的有關(guān)規(guī)定,該方法可以用于測定大鼠血漿中 GA和 PCA的含量。
　　利用該方法對不同劑量灌胃給藥(0.36、1.08和2.16 g·kg-1)熱淋清顆粒后 GA和 PCA在大鼠血漿藥代動力學(xué)進(jìn)行研究,通過

7、測定血漿不同時間點 GA和 PCA的濃度,采用數(shù)理統(tǒng)計學(xué)軟件計算了灌胃給藥熱淋清顆粒后的藥代動力學(xué)參數(shù)。
　　灌胃熱淋清顆粒后,低、中、高三個劑量組 GA的 t1/2分別為128.52、93.72和114.70 min;Cmax分別為245.98、477.20和805.76 ng·mL-1; AUC0-∞分別為53776.77、97385.52、204204.47μg·L-1·min-1;在0.36~2.16g·kg-1的劑量范圍

8、內(nèi),GA在大鼠體內(nèi)呈現(xiàn)線性藥代動力學(xué)特征(γ>0.98)。
　　灌胃熱淋清顆粒后,低、中、高三個劑量組 PCA的 t1/2分別為42.81、90.15和49.80 min;Cmax分別為11.90、24.66和31.04ng·mL-1;AUC0-∞分別為943.88、2943.38、4222.79μg·L-1·min-1;在0.36~2.16g·kg-1的劑量范圍內(nèi),PCA在大鼠體內(nèi)呈現(xiàn)線性藥代動力學(xué)特征(γ>0.90)。

9、　　二、口服熱淋清顆粒后 GA和 PCA的組織分布研究
　　建立并驗證了 LC-MS/MS法測定大鼠各組織中 GA和 PCA含量的方法,方法學(xué)驗證結(jié)果表明,該方法操作方便,靈敏度高,專屬性好;準(zhǔn)確度、精密度、回收率和穩(wěn)定性考察結(jié)果均符合目前生物樣品分析方法指導(dǎo)原則的有關(guān)規(guī)定。利用該方法對灌胃熱淋清顆粒(1.08 g·kg-1)后 GA和 PCA在大鼠各組織,包括心、肝、脾、肺、腎、腦等組織的分布情況進(jìn)行研究,結(jié)果表明:灌胃給藥1

10、h后,GA主要分布在腎臟組織,其次為肺、肝組織,濃度分別為1218.62、258.08和231.55 ng·g-1;PCA主要分布在腎臟組織,其次為肺臟組織,濃度分別為43.98和19.48 ng·g-1。灌胃給藥3 h后,除腎臟組織中檢測到GA(143.54ng·g-1)外,其余組織均未檢出 GA和 PCA。灌胃熱淋清顆粒后 GA和 PCA在腎臟組織中集中分布與其臨床治療尿路感染和腎盂腎炎的用途相符合。
　　三、口服熱淋清顆粒后

11、 GA和 PCA的排泄研究
　　分別建立并驗證了 LC-MS/MS法測定大鼠尿液和糞便中 GA和PCA含量的方法,方法學(xué)驗證結(jié)果表明,所建立方法操作簡便,靈敏度高、專屬性好,利用該方法對灌胃熱淋清顆粒后 GA和 PCA在大鼠尿液和糞便中的排泄情況進(jìn)行了研究。
　　灌胃熱淋清顆粒后,0.36、1.08、2.16g·kg-1三個劑量組GA在48 h內(nèi)尿液中的排出量分別為108.80、361.44和950.38μg;排泄率分別為1

12、3.19、14.60和19.20％;GA在48 h內(nèi)糞便中的排出量分別為21.25、93.16、192.10μg;排泄率分別為2.58、3.76和3.88%;總排泄率均<23.08%,顯示 GA在大鼠體內(nèi)發(fā)生了較廣泛的代謝。
　　灌胃熱淋清顆粒后,0.36、1.08、2.16 g·kg-1三個劑量組 PCA在48 h內(nèi)尿液中的排出量分別為6.76、29.55和60.69μg;排泄率分別為10.79、12.57和16.15%;PCA

13、在48 h內(nèi)糞便中的排出量分別為3.56、6.74、12.19μg;排泄率分別為5.68、3.59和3.24%;總的排泄率均<19.39%,顯示 PCA在大鼠體內(nèi)也發(fā)生了較廣泛的代謝。
　　四、頭花蓼藥材提取工藝優(yōu)化研究
　　研究發(fā)現(xiàn),頭花蓼藥材中富含黃酮類成分,且黃酮類化合物具有較強(qiáng)的生物活性,但頭花蓼的水提物中,黃酮類成分的提取效率不高,造成資源植物的浪費(fèi)。因此,本實驗通過采用單因素結(jié)合響應(yīng)曲面法對頭花蓼藥材中槲皮苷(q