莫吉斯坦藥代動(dòng)力學(xué)及體內(nèi)代謝研究.pdf

1、目的:1.建立靈敏度高、專屬性強(qiáng)、方便可行的HPLC-MS法測(cè)定人血漿莫吉斯坦代謝產(chǎn)物M1的濃度。2.進(jìn)行莫吉斯坦片三劑量(200、400和600mg)單次口服給藥和單劑量多次(200mg，tid，×7日)口服給藥人體藥代動(dòng)力學(xué)研究。3.建立HPLC-MS法測(cè)定人尿液莫吉斯坦代謝產(chǎn)物M1的濃度。4.進(jìn)行莫吉斯坦片400mg單次口服后代謝產(chǎn)物M1的尿液排泄動(dòng)力學(xué)研究。5.分析莫吉斯坦在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物，研究體內(nèi)轉(zhuǎn)化規(guī)律。
　　

2、方法:1.以莫吉斯坦代謝產(chǎn)物M1為檢測(cè)指標(biāo)，血漿樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白處理，Diamonsil(@)C18(2)色譜柱(150mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相0.1％甲酸:乙腈(57:43，V/V)，流速0.8mL·min-1，AP-ESI離子源，選擇性監(jiān)測(cè)m/z為312.2(M1)和446.3(I.S.)的離子峰。2.三劑量單次口服給藥:30名受試者分為3組，分別空腹口服莫吉斯坦片200、400和600mg，于藥前(0h)和藥后0.25

3、、0.5、0.75、1、1.25、1.5、2、3、4、5、6、8h經(jīng)肘靜脈取血4mL。單劑量多次口服給藥:10名受試者空腹口服莫吉斯坦片200mg，tid，連續(xù)6日，于4、5、6、7日早7:00給藥前(0h)和第7日早7點(diǎn)末次給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.25、1.5、2、3、4、5、6、8h經(jīng)肘靜脈取血4mL。莫吉斯坦代謝產(chǎn)物M1經(jīng)時(shí)血濃度經(jīng)HPLC-MS測(cè)定，數(shù)據(jù)經(jīng)DAS2.0實(shí)用藥代動(dòng)力學(xué)程序處理，評(píng)價(jià)M1藥代動(dòng)力學(xué)特

4、征和劑量相關(guān)性。3.HPLC-MS法測(cè)定人尿液中莫吉斯坦代謝產(chǎn)物M1的濃度:色譜、質(zhì)譜條件與人血漿中M1濃度測(cè)定的方法相同。尿液樣本進(jìn)樣前經(jīng)適當(dāng)稀釋處理。4.經(jīng)時(shí)尿液濃度經(jīng)HPLC-MS測(cè)定，數(shù)據(jù)經(jīng)DAS2.0實(shí)用藥代動(dòng)力學(xué)程序處理，得M1尿液累積排泄率及排泄參數(shù)。400mg劑量組單次口服給藥后收集血液樣本同時(shí)，分別于給藥前(0h)和給藥后0-1、1-2、2-3、3-4、4-6、6-8、8-10、10-12、12-24h，收集尿液。5.

5、先利用HPLC-QTOF-MS技術(shù)分析莫吉斯坦大鼠生物樣本，尋找可能的代謝產(chǎn)物，使用AgilentmetaboliteID軟件對(duì)系列代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析預(yù)測(cè)。利用HPLC-MS/MS技術(shù)，分析莫吉斯坦的一級(jí)質(zhì)譜，然后對(duì)母離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析。確定莫吉斯坦的母離子和特征碎片離子及其來源，推斷莫吉斯坦可能的裂解途徑，總結(jié)其裂解特征。收集灌胃給予莫吉斯坦后大鼠的膽汁、血漿、尿液、糞便等生物樣本，對(duì)大鼠體內(nèi)生物樣本進(jìn)行一級(jí)掃描，并對(duì)可能的代謝產(chǎn)物進(jìn)

6、行二級(jí)質(zhì)譜分析，根據(jù)代謝產(chǎn)物的保留時(shí)間和MS/MS信息推測(cè)代謝產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果:1.HPLC-MS法測(cè)定莫吉斯坦代謝產(chǎn)物M1經(jīng)時(shí)血濃度，M1在0.02～8μg·mL-1血漿濃度范圍內(nèi)線性良好。空白血漿對(duì)待測(cè)物無基質(zhì)效應(yīng)和離子抑制效應(yīng)，提取回收率大于90％，日內(nèi)、日間變異均小于10％，穩(wěn)定性良好。2.莫吉斯坦片200mg、400mg、600mg單次口服，M1主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Tmax為1.30±0.44h、1.35±0

7、.21h、1.20±0.41h，AUC0～8分別為3.73±1.20μg.mL-1·h、7.02±1.22μg·mL-1·h、11.23±2.53μg·mL-1·h，t1/2分別為0.65±0.09h、0.88±0.20h、0.87±0.17h。單劑量多次口服給藥Tmax為1.25±0.35h，AUC-72～8為4.02±0.63μg·mL-l·h，t1/2為0.95±0.46h。3.HPLC-MS法測(cè)定M1尿液濃度，待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)與尿液

8、中內(nèi)源性物質(zhì)有良好分離，M1在0.05～8μg·mL-1尿液濃度范圍內(nèi)線性良好?？瞻啄蛞簩?duì)待測(cè)物無基質(zhì)效應(yīng)和離子抑制效應(yīng)，日內(nèi)、日間變異均小于10％，穩(wěn)定性良好，稀釋后不影響M1尿液樣本的測(cè)定。4.400mg劑量組單次口服給藥后M124h之內(nèi)的尿累積排泄量存在較大的個(gè)體差異，24h尿累積排泄量為121.073±59.108mg，累積排泄率為32.990±16.106％，尿藥排泄速率常數(shù)為0.433±0.037h-1，半衰期為1.613±

9、0.132h。5.分析后發(fā)現(xiàn)莫吉斯坦在大鼠體內(nèi)發(fā)生生物轉(zhuǎn)化，膽汁、血漿、尿液、糞便樣本中均存在莫吉斯坦可能的4個(gè)代謝產(chǎn)物（分子量分別為M1311.1，M2327.1，M3297.1和M4325.1）。
　　 結(jié)論:1.健康受試者單次口服莫吉斯坦片200mg、400mg、600mg后代謝產(chǎn)物M1Cmax和AUC與給藥劑量呈良好線性關(guān)系，體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)過程符合權(quán)重系數(shù)為1的二室模型;大部分藥物在6h內(nèi)以M1的形式從尿液排泄，清除較快