珠母貝糖胺聚糖增強免疫功能及安全毒理學評價.pdf

1、目的：研究珠母貝糖胺聚糖對小鼠機體免疫功能的影響，并對其安全毒理學進行評價，為開發(fā)出具有增強免疫功能的珠母貝糖胺聚糖保健食品提供科學依據(jù)。 方法： 增強免疫功能實驗方法：(1)采用免疫器官指數(shù)法和碳廓清實驗，檢測珠母貝糖胺聚糖粗品(CPG)對正常和免疫低下小鼠臟器指數(shù)及單核-吞噬細胞吞噬能力的影響。(2)采用MTT法體外檢測CPG及PG-1、PG-2(CPG經(jīng)DEAE-52-纖維素柱層析純化級分)直接和協(xié)同ConA對小鼠

2、脾淋巴細胞增殖的影響。(3)采用比色法檢測CPG對正常和免疫低下小鼠抗體生成細胞數(shù)和血清溶血素含量的影響。(4)采用乳酸酶脫氫法(LDH法)體外檢測CPG、PG-1、PG-2對小鼠NK細胞活性的影響。 安全毒理學評價方法：(1)小鼠急性毒性試驗：采用最大耐受劑量法，將CPG以21.50g/kg·BW劑量灌胃KM小鼠后，連續(xù)觀察14d，記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況。(2)Ames試驗：采用鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、T

3、A100、TA102四種菌株進行試驗，試驗設(shè)4個劑量組即10.00、5.00、2.50、1.25mg/皿，觀察各組回變菌落數(shù)。(3)小鼠骨髓細胞微核試驗：劑量為2.50、1.25、0.625g/kg·BW，顯微鏡下每只動物計數(shù)1000個嗜多染紅細胞，記錄含有微核的嗜多染紅細胞數(shù)，并計算嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比值(PCE/RBC)。(4)小鼠精子畸形試驗：試驗劑量同小鼠骨髓細胞微核試驗，每只小鼠觀察1000個精子，記錄畸形精子數(shù)。(5

4、)30天喂養(yǎng)試驗：以劑量0.625、1.25、2.5g/kg·BW進行SD大鼠30天喂養(yǎng)試驗，分析CPG對大鼠體重、食物利用率、血常規(guī)指標、血生化指標、臟器重量以及臟器指數(shù)的影響，并進行大體解剖觀察和主要臟器的組織病理學檢查。 結(jié)果：增強免疫功能實驗結(jié)果：(1)中劑量(100mg·kg-1)的CPG可極顯著性提高正常小鼠免疫器官指數(shù)和廓清指數(shù)(P<0.01)。高劑量(200mg·kg-1)的CPG可極顯著性拮抗CY引起的脾指數(shù)降

5、低(P<0.01)，并使其恢復正常水平(P>0.05)；高劑量CPG可顯著性拮抗CY引起的廓清指數(shù)降低(P<0.05)，并恢復至正常以上水平(P<0.05)。(2)CPG、PG-1、PG-2均可極顯著性刺激和協(xié)同ConA刺激脾淋巴細胞增殖(P<0.01)。直接刺激時，高劑量(100μg·mL-1)的CPG刺激指數(shù)最大，為1.40；協(xié)同ConA刺激時，中劑量(50μg·mL-1)的PG-2刺激指數(shù)最高，為1.44。(3)低劑量CPG(50

6、mg·kg-1)能極顯著性增加正常和免疫低下小鼠的抗體生成細胞數(shù)(P<0.01)，但高劑量(200mg·kg-1)的CPG未能增加正常小鼠抗體細胞的生成，且抑制免疫低下小鼠抗體細胞的生成(P<0.01)。(4)三個劑量的CPG均可顯著性增加正常和免疫低下小鼠的血清溶血素含量，以中劑量(100mg·kg-1)的CPG作用效果最強(P<0.01)。(5)CPG、PG-1、PG-2均可極顯著性增強小鼠NK細胞的殺傷活性(P<0.01)，PG-

7、2的殺傷活性強于CPG、PG-1，高劑量(100μg·mL-1)PG-2的殺傷率達到42.89％。 安全毒理學試驗結(jié)果：(1)小鼠的經(jīng)口急性毒性試驗結(jié)果顯示，試驗期間動物無死亡，且未出現(xiàn)異常癥狀，經(jīng)口最大耐受劑量大于21.50g/kg·BW。(2)Ames試驗結(jié)果顯示CPG無致突變性，小鼠骨髓細胞微核試驗結(jié)果顯示CPG對小鼠骨髓嗜多染紅細胞的微核形成率無顯著影響，小鼠精子畸形試驗結(jié)果顯示CPG對小鼠精子的畸形率無顯著影響。三項遺