羅格列酮在牙齦卟啉單胞菌感染促ApoE---小鼠動脈粥樣硬化形成中的抑制作用.pdf

1、目的：牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis，P.gingivalis）是慢性牙周炎重要的致病菌。研究證實，P. gingivalis牙周接種或者血液注射會加重血管壁的炎癥反應(yīng)，加速動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）的進(jìn)展。目前認(rèn)為，AS是一種慢性炎癥性疾病，因此抗炎治療被認(rèn)為可能是一種可行的抑制AS的治療策略。過氧化物酶體增殖物激活受體-γ（Peroxisome Proliferator-a

2、ctivated receptor-γ，PPAR-γ）屬于核激素受體超家族，是受配體激活的轉(zhuǎn)錄核因子，在脂質(zhì)和葡萄糖代謝中發(fā)揮重要作用，目前發(fā)現(xiàn)其也具有廣泛的炎癥抑制作用。羅格列酮（rosiglitazone，RSG）是PPAR-γ特異性的人工合成激動劑。P. gingivalis及其產(chǎn)物具有病原體相關(guān)分子模式（pathogen associated molecule patterns，PAMPs），能夠激活宿主防御系統(tǒng)的Toll樣受體

3、（Toll like receptor，TLRs）,從而激活下游信號傳導(dǎo)通路如核因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）。本研究擬進(jìn)一步研究P. gingivalis感染促進(jìn) AS形成的機(jī)制，并探索 PPAR-γ激動劑羅格列酮在 P. gingivalis-TLRs-NF-κB信號通路的作用。
　　方法：體外培養(yǎng)人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞（human aortic endothelial cells，HAECs），按照下列

4、分組分別加以相應(yīng)刺激：空白組、RSG組、P. gingivalis組和P. gingivalis+RSG組。實時熒光定量PCR（real time quantitative PCR，RT-qPCR）檢測單核細(xì)胞趨化因子（monocyte chemotactic protein1,MCP-1）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin1β，IL-1β）、TLR-2、TLR-4和細(xì)胞間黏附分子-1（intercellular adhesio

5、n molecule-1,ICAM-1）的mRNA表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測細(xì)胞上清MCP-1和IL-1β表達(dá)，Western Blot法檢測細(xì)胞中 TLR-2、TLR-4和 ICAM-1表達(dá)，凝膠遷移實驗（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）法檢測細(xì)胞中NF-κB活化水平。
　　結(jié)果：⑴P.gingi

6、valis以濃度依賴性（MOI：0、25:1、100:1和200:1)上調(diào)HAECs中MCP-1、IL-1β、ICAM-1、TLR-2和TLR-4的表達(dá)，并促進(jìn)HAECs中NF-κB活化；RSG濃度依賴性（（0、2.5、5和10μM）上調(diào)HAECs中PPAR-γ的表達(dá)，RSG濃度依賴性的抑制 P. gingivalis刺激的HAECs中MCP-1、IL-1β、ICAM-1、TLR-2和TLR-4的表達(dá)，并抑制P. gingivalis刺

7、激的HAECs中NF-κB的活化。結(jié)論：P. gingivalis可能通過TLRs-NF-κB信號通路，導(dǎo)致HAECs炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷；RSG抑制P. gingivalis對TLRs-NF-κB信號通路的激活，減輕內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)。⑵RSG治療激活主動脈中PPAR-γ的表達(dá)，減少了P. gingivalis菌血癥感染所致動脈粥樣斑塊面積和血清中TNF-α、MCP-1和IL-1β的水平，降低了血清中總膽固醇（total chol

8、esterol，Tc）和低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-c），抑制了P.gingivalis菌血癥所致主動脈組織中 ICAM-1、TNF-α、MCP-1、TLR-2和TLR-4的表達(dá)和NF-κB活化水平。⑶P.gingivalis牙周感染導(dǎo)致明顯的牙槽骨吸收；P. gingivalis牙周感染增加ApoE-/-小鼠主動脈粥樣斑塊面積；RSG激活主動脈中PPAR-γ的表達(dá)

9、，減少了P. gingivalis牙周感染所致粥樣斑塊面積，抑制血液中促炎細(xì)胞因子表達(dá)，降低了血清中Tc和LDL-c，減少了P. gingivalis牙周感染所致ICAM-1、TNF-α、MCP-1、TLR-2和TLR-4的表達(dá)，抑制了P. gingivalis牙周感染所致主動脈組織中NF-κB活化。
　　結(jié)論：P.gingivalis牙周感染可能通過TLRs-NF-κB信號通路，引發(fā)血管局部和全身系統(tǒng)炎癥反應(yīng)，ApoE-/-小鼠