β-arrestin2及內質網(wǎng)應激在隱腦患者發(fā)病機制中的探討.pdf

1、目的:隱球菌性腦膜炎(CryptococcalMeningitisCM,簡稱隱腦)是由新型隱球菌(CryptococcusneoformansCn,簡稱隱球菌)侵犯腦膜和/或腦實質引起的中樞神經系統(tǒng)感染性疾病。主要見于免疫功能受損患者及少數(shù)免疫功能正常者。在國外隱腦患者多為HIV陽性患者,國內隱腦患者多為器官移植,長期應用免疫抑制劑、激素,存在基礎疾病患者。近年來隨著激素、免疫抑制劑、廣譜抗生素應用的增加,器官移植、顱內有創(chuàng)檢查、國內艾

2、滋病的流行以及實驗室檢測水平的提高,隱腦發(fā)病率有明顯上升趨勢。由于目前抗真菌藥物的不足,顱內并發(fā)癥的發(fā)生,隱腦的死亡率仍然很高。研究表明機體感染隱球菌后的轉歸很大程度上取決于細胞因子的分布和機體免疫狀況。本研究通過檢測隱球菌性腦膜炎患者腦脊液中的細胞因子β-arrestin2的含量,探討其在發(fā)病機制中的意義,為隱腦治療提供新的治療方向;并利用激光掃描共聚焦顯微鏡技術對腦脊液細胞內質網(wǎng)應激標志物ATF4進行觀測。
　　 方法:20

3、09年6月至2012年6月河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院神經內科和兒科的住院及門診患者。根據(jù)所患疾病將50例患者分為2組,一組為病例組(25例):隱球菌性腦膜炎患者;另一組為對照組(25例)包括缺血管性頭痛患者22例,癔病患者1例,缺血性腦血管病患者1例,支氣管肺炎患者1例。其中病例組包括兩組:治療前組與治療后組。所有入組患者均行腰椎穿刺術檢查,腦脊液標本送檢常規(guī)、生化,并行腦脊液細胞學系列(MGG,阿利新蘭染色)檢查,應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附

4、法(ELISA)法定量測定腦脊液標本中的β-arrestin2含量;免疫熒光細胞化學染色法以FITC熒光二抗及Hoechst分別標記抗ATF4、細胞核DNA,置于激光掃描共聚焦顯微鏡(LSCM)下觀察。
　　 結果:
　　 1.臨床資料
　　 隱球菌性腦膜炎患者可表現(xiàn)為頭疼、發(fā)熱、腦膜刺激征陽性、顱高壓癥狀、意識障礙、癲癇發(fā)作等。25例隱腦患者均有不同程度的頭痛(100％),23例患者中有腦膜刺激征者18例(78

5、.26％),17例患者出現(xiàn)發(fā)熱(73.92％),5例患者出現(xiàn)了顱神經(常見視、聽、外展神經)損傷(21.74％),6例患者出現(xiàn)意識障礙(26.09％),2例患者出現(xiàn)癲癇發(fā)作(8.70％),2例患者乏臨床資料。
　　 基礎病情況,25例患者中17例患者存在基礎病(68％),7例患者無明確既往病史,1例患者既往病史不詳。
　　 治療后腦脊液內隱球菌計數(shù)情況,經治療后菌轉陰者4例(16％),菌明顯減少者15例(60％),菌未明

6、顯減少但腦脊液細胞學好轉者6例(24％)。經治療病情無好轉死亡者2例(1例患者腦脊液中隱球菌計數(shù)減少,1例患者腦脊液中隱球菌計數(shù)未見減少),死亡率為8％。
　　 2.腦脊液常規(guī)、生化檢查結果
　　 隱腦組23例患者的腦脊液常規(guī),生化結果(病例組2例患者缺乏臨床資料):隱腦治療前組腦脊液總細胞數(shù)平均值138.52±160.08×106/L;白細胞數(shù)平均值53.22±59.07×106/L;葡萄糖含量平均值為2.55±1.0

7、6mmol/L;蛋白含量平均值為0.68±0.47g/L;氯化物含量平均值為118.95±6.15mmol/L。隱腦治療后組腦脊液總細胞數(shù)平均值為201.43±525.02×106/L;白細胞數(shù)平均值為16.04±28.47×106/L;葡萄糖含量平均值為3.28±1.20mmol/L;蛋白含量平均值為0.54±0.24g/L;氯化物含量平均值為124.43±5.56mmol/L。對照組總細胞平均值為9.43±17.04×106/L;白

8、細胞平均值為0.91±1.31×106/L;葡萄糖平均值為3.28±0.43mmol/L;蛋白含量平均值為0.29±0.08g/L;氯化物含量平均值為123.63±2.64mmol/L。
　　 隱球菌性腦膜炎治療前組腦脊液中總細胞數(shù)、白細胞數(shù)、蛋白含量與對照組相比較高,P＜0.05,差異具有統(tǒng)計學意義;隱球菌性腦膜炎治療前組腦脊液中的葡萄糖、氯化物含量與對照組相比較低,P＜0.05,差異具有統(tǒng)計學意義。但隱球菌性腦膜炎治療前后兩

9、組相比,腦脊液中蛋白、氯化物、葡萄糖含量均無明顯差異性,P＞0.05,不存在統(tǒng)計學差異。
　　 3.腦脊液細胞學反應特點
　　 病例組25例患者治療后與治療前相比,4例患者腦脊液隱球菌轉陰,15例患者腦脊液隱球菌明顯減少,6例患者腦脊液隱球菌未見明顯減少,但腦脊液細胞學較前好轉。病例組中3例患者缺乏腦脊液細胞學細胞計數(shù)資料,余22例患者治療前腦脊液細胞學嗜中性粒細胞水平0～90％,中位值:11.5％;治療后嗜中性粒細胞明

10、顯減少0～8.7％,中位值:1％,且淋巴細胞與單核細胞比例趨向于正?；?。經比較治療前后腦脊液細胞學中性粒細胞計數(shù)相比差異有統(tǒng)計學意義(P=0.002＜0.005)。
　　 4.腦脊液中β-arrestin2含量測定
　　 隱腦組治療前腦脊液β-arrestin2水平為(16.59～137.55)pg/ml,含量平均值為35.45±25.41pg/ml;隱腦組治療后腦脊液β-arrestin2水平為(13.39～35.36

11、)pg/ml,含量平均值為16.57±6.05pg/ml;對照組腦脊液β-arrestin2水平為(12.26～19.04)pg/ml,含量平均值為15.39±2.02pg/ml;經比較病例組治療前與治療后差異具有統(tǒng)計學意義;病例組治療前與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義;病例組治療后與對照組差異無統(tǒng)計學意義。
　　 25例隱腦患者中,治療后腦脊液隱球菌明顯減少(包括轉陰者)的19例患者,治療前腦脊液β-arrestin2水平為(16

12、.59～137.55)pg/ml,含量平均值為35.89±28.55pg/ml;治療后腦脊液β-arrestin2水平為(13.39～33.11)pg/ml,含量平均值為18.17±5.57pg/ml。治療后腦脊液隱球菌未明顯減少的6例患者,治療前腦脊液β-arrestin2水平為(19.50～41.41)pg/ml,含量平均值為25.72±8.46pg/ml;治療后腦脊液β-arrestin2水平為(14.97～35.36)pg/ml

13、,含量平均值為20.77±7.61pg/ml;經比較病例組菌明顯減少者與菌未明顯減少者治療前差異無統(tǒng)計學意義,治療后差異亦無統(tǒng)計學意義。
　　 5.腦脊液細胞內質網(wǎng)應激標志物ATF4變化
　　 應用免疫熒光細胞化學染色,觀察4例隱腦患者及3例對照組患者腦脊液細胞內質網(wǎng)應激標志物ATF4:隱腦組4例患者,可見ATF4進入細胞核,且表達量明顯增多;對照組3例患者,ATF4位于細胞質中,且量極少。
　　 結論:

14、　　 1.隱球菌性腦膜炎臨床表現(xiàn)多樣,缺乏特異性,且病死率較高。
　　 2.隱球菌為機會致病菌,隱球菌性腦膜炎常見于免疫受損患者,對于免疫受損患者出現(xiàn)腦膜刺激征時,應高度警惕隱球菌性腦膜炎。
　　 3.隱球菌性腦膜炎患者治療前腦脊液中β-arrestin2含量高于對照組腦脊液中β-arrestin2含量,隱腦治療前組與治療后組相比,腦脊液中β-arrestin2含量較高,差異有統(tǒng)計學意義。
　　 4.隱球菌性腦