內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在抑郁障礙后腦供血不足的發(fā)病機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在抑郁障礙后腦供血不足的發(fā)病機(jī)制，分析比較草酸艾司西酞普蘭（Escitalopram）、N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl cysteine， NAC）、美托洛爾（Metoprolol）對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡通路相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控作用。
　　方法：
　　成年健康雄性SD大鼠（n=45，250±20g），隨機(jī)分為5組（9只/組），分別為對(duì)照組，抑郁模型組，抑郁模型+草酸艾司西酞普蘭組(10 mg/kg

2、/d)，抑郁模型+N-乙酰半胱氨酸組(125mg/kg/d)，抑郁模型+美托洛爾組(10mg/kg/d)，除對(duì)照組外，同時(shí)對(duì)其余4組大鼠進(jìn)行慢性輕度不可預(yù)見性刺激，刺激的同時(shí)不同藥物組同時(shí)腹腔注入相應(yīng)的藥物共4周，造模結(jié)束后進(jìn)行敞箱實(shí)驗(yàn)和糖水偏好實(shí)驗(yàn)確定大鼠的抑郁狀態(tài)。透射電鏡觀察海馬皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞微觀結(jié)構(gòu)，流式細(xì)胞術(shù)AnnexinV-PI雙標(biāo)染色法檢測(cè)各組大鼠腦組織凋亡情況；采用黃嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法及硝酸鹽還原酶法檢測(cè)各組大鼠

3、腦組織海馬以及額葉皮質(zhì)一氧化氮（NO）濃度、一氧化氮合酶（NOS）活性以及超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）濃度；使用免疫印跡法（Wb）檢測(cè)腦組織中內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酸化內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS-ser1179）、抗葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CHOP）、促凋亡因子半胱氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）的蛋白表達(dá)量。熒光實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（rt-PCR）檢

4、測(cè)eNOS、GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1.與對(duì)照組比較，抑郁組體重、敞箱實(shí)驗(yàn)得分、糖水偏好得分均顯著減少。與抑郁組比較，美托洛爾組、NAC組，草酸艾司西酞普蘭組敞箱實(shí)驗(yàn)和糖水偏好實(shí)驗(yàn)得分增加(P<0.05)。
　　2.透射電鏡顯示與對(duì)照組比較，抑郁組和美托洛爾組大鼠神經(jīng)細(xì)胞核腫脹、膜結(jié)構(gòu)模糊，血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，毛細(xì)血管狹窄。與抑郁組比較，艾司西酞普蘭組細(xì)胞腫脹較輕

5、微，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷較輕。
　　3.流式細(xì)胞結(jié)果顯示凋亡率：與對(duì)照組[海馬(25.5±3.5)％、皮質(zhì)(24.1±8.6)%]比較，抑郁組[海馬(42.9±3.8)%、皮質(zhì)(44.8±5.6)%]凋亡率明顯升高。NAC組[海馬(42.9±3.8)%、皮質(zhì)(44.8±5.6)%]與草酸艾司西酞普蘭組[海馬(33.3±4.3)%、皮質(zhì)(30±1.5)%]比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。
　　4.酶標(biāo)儀檢測(cè)：與對(duì)照組比較

6、，抑郁組NOS活性增高，NO、MDA濃度升高，SOD活性降低。與抑郁組比較，艾斯西酞普蘭組、美托洛爾組和NAC組的NOS活性降低，NO、MDA濃度降低， SOD活性升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5.rt-PCR檢測(cè)結(jié)果分析：與對(duì)照組比較，抑郁組海馬與皮質(zhì)eNOS mRNA相對(duì)表達(dá)量下調(diào)，Caspase12、GRP78、CHOP mRNA相對(duì)表達(dá)量上調(diào)（P＜0.05）。與抑郁模型組比較，NAC組和艾司西酞普蘭組海馬

7、與皮質(zhì) eNOS表達(dá)升高，Caspase12、GRP78、CHOP mRNA相對(duì)表達(dá)量降低（P＜0.05）。
　　6.免疫印跡法（Wb）結(jié)果分析：與對(duì)照組比較，抑郁組海馬eNOS和eNOS-ser1179蛋白相對(duì)表達(dá)量降低，Caspase12、GRP78、CHOP相對(duì)表達(dá)量升高（P＜0.05）。與抑郁組比較，NAC組和草酸艾司西酞普蘭組海馬eNOS和 eNOS-ser1179蛋白相對(duì)表達(dá)量升高，Caspase12、GRP78、CH

8、OP蛋白相對(duì)表達(dá)降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.抑郁組大鼠行為學(xué)得分與體重降低，美托洛爾、NAC、艾司西酞普蘭可改善大鼠抑郁行為。
　　2.抑郁癥大鼠海馬與皮質(zhì)細(xì)胞凋亡率增加， NAC與艾司西酞普蘭能減少大鼠細(xì)胞凋亡率，美托洛爾抗凋亡作用不明顯。
　　3.電鏡下觀察抑郁癥大鼠神經(jīng)細(xì)胞和毛細(xì)血管破壞，NAC與艾司西酞普蘭改善大鼠神經(jīng)細(xì)胞腫脹和毛細(xì)血管破壞，美托洛爾改善效果不佳。
　　4.抑郁癥大鼠

9、腦組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA、NO濃度和NOS活性升高，抗氧化物 SOD活性降低，美托洛爾、NAC和艾司西酞普蘭可降低大鼠MDA、NO、NOS，升高SOD活性。
　　5.抑郁癥大鼠腦組織中eNOS的蛋白與mRNA表達(dá)量降低，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、Caspase12和CHOP的蛋白與mRNA相對(duì)表達(dá)量升高，美托洛爾、NAC與艾司西酞普蘭能增加eNOS的蛋白與mRNA的表達(dá)，NAC與艾司西酞普蘭能可降低腦組織中 GRP78、Ca