內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在應(yīng)力介導(dǎo)的成肌細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制.pdf

1、摘要目的：功能矯形是口腔正畸醫(yī)生進(jìn)行牙齒矯正治療的一項(xiàng)重要輔助治療手段。臨床上正畸醫(yī)生通過功能矯形對(duì)面部畸形的青少年患者進(jìn)行矯正。隨著應(yīng)力的刺激面頜部肌肉組織發(fā)生結(jié)構(gòu)和功能上的改變，進(jìn)而使口腔畸形得以矯正。面頜部肌肉組織發(fā)生改建的基礎(chǔ)是細(xì)胞，應(yīng)力刺激細(xì)胞從而引起一系列生物反應(yīng)，但是它是如何發(fā)生一系列反應(yīng)的，這就需要我們深入的探索。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞內(nèi)一種程序性死亡方式，死亡受體活化和線粒體損傷途徑是細(xì)胞內(nèi)兩條經(jīng)典的凋亡途徑，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是近年

2、來發(fā)現(xiàn)的一條新途徑。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)重要的細(xì)胞器，能夠調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)等。但是在病理或生理?xiàng)l件下如鈣離子的流失、蛋白表達(dá)受抑制等會(huì)引起未折疊蛋白或錯(cuò)誤折疊蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)聚集、損傷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的正常生理功能引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激最初不會(huì)引起細(xì)胞損傷，在UPR調(diào)整下可以修復(fù)細(xì)胞但是損傷太過嚴(yán)重就會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)并引起凋亡。本實(shí)驗(yàn)我們?cè)隗w外構(gòu)建完善的大鼠L6成肌細(xì)胞力學(xué)刺激模型的前提下：探討應(yīng)力對(duì)大鼠L6成肌細(xì)胞的影響，應(yīng)力是否因引

3、起成肌細(xì)胞凋亡；研究應(yīng)力是否引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；在前兩個(gè)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果的基礎(chǔ)上檢驗(yàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否引起成肌細(xì)胞凋亡發(fā)生凋亡的其具體機(jī)制是什么。通過上述研究了解功能矯形的微觀分子機(jī)制并為臨床正畸治療提供理論指導(dǎo)意義。方法：在體外實(shí)驗(yàn)中，我們采用成肌細(xì)胞株(品種為大鼠L6購自中國科學(xué)院)作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象；采用多通道細(xì)胞應(yīng)力加載系統(tǒng)在成功構(gòu)建體外成肌細(xì)胞力學(xué)刺激模型模型的基礎(chǔ)上，對(duì)所培養(yǎng)的細(xì)胞持續(xù)施加一定時(shí)間的周期性張應(yīng)力(Oh、lh、6h、12h、24

4、h)最后使其發(fā)生周期性張應(yīng)變(加載力值15％，加載頻率10cycles／min)，設(shè)Oh組為對(duì)照組與其它組在同一環(huán)境下培養(yǎng)；采用Hoechst33258熒光染色以及DAPI染核觀察細(xì)胞凋亡情況；利用倒置熒光顯微鏡從形態(tài)學(xué)上觀察不同持續(xù)時(shí)間的張應(yīng)力對(duì)細(xì)胞凋亡的影響并；通過流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞的凋亡率；采用RTPCR和WestemBlotting檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶分子GRP78／BIP，檢測應(yīng)力是否引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；RT—PCR和WesternBl

5、otting檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激引起的細(xì)胞凋亡相關(guān)分子CHOP和Caspase12的表達(dá)變化；應(yīng)用Caspase12特異性抑制劑zATADfmk和Caspase3特異性抑制劑zDEVD—fmk來明確Caspase12和Caspase3在應(yīng)力介導(dǎo)的成肌細(xì)胞中的作用，以及二者之間的關(guān)系；采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSSl80對(duì)以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。碩士研究生劉麗娟(口腔正畸學(xué))指導(dǎo)老師袁曉教授關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；CHOP；周期性張應(yīng)力；成肌細(xì)胞：