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文檔簡介
1、產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌(LM)是重要的人畜共患病原菌及毒力最強(qiáng)的食源性病原菌,LM的致病性與毒力基因密切相關(guān),缺失毒力基因可以導(dǎo)致其致病性的消失或下降。而不同環(huán)境因子作用于 LM后是否影響其毒力基因表達(dá),從而喪失其已有的毒力,不同來源分離株 LM對(duì)不同環(huán)境因子的耐受性是否相同等仍不清楚。本研究以食源性 LM標(biāo)準(zhǔn)株、綿羊腦炎 LM分離株(LM90)及青貯飼草分離株 LM(LM19)作為試驗(yàn)菌株,分別采用不同溫度、PH值、氯化鈉濃度、紫外線進(jìn)行
2、作用,通過檢測(cè)LM的生長狀態(tài)、毒力因子、主要毒力基因的表達(dá)情況,以確定不同來源 LM分離株對(duì)不同環(huán)境因子的抗性,為進(jìn)一步探討 LM的保菌機(jī)制、維持致病力機(jī)制及食源性 LM傳播控制提供參考。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
1、不同來源 LM對(duì)不同理化因子的抗性
采用不同溫度、pH、氯化鈉濃度、紫外線作用不同來源 LM,通過活菌計(jì)數(shù)和吸光度檢測(cè)觀察細(xì)菌生長狀況。結(jié)果62℃30分鐘和72℃30分鐘三株 LM均生長,其中食源性LM
3、對(duì)熱抗性最強(qiáng)、LM19最弱,100℃時(shí)三株 LM均不生長,提示巴氏消毒方法對(duì)處理污染 LM的食品時(shí)存在安全隱患;低溫環(huán)境4℃/10d、4℃/20d、-20℃/10d和-20℃/20d下 LM仍存活,4℃較-20℃更利于 LM生長,其中 LM19對(duì)低溫的抗性最強(qiáng),LM90最弱,提示低溫冷藏和冷凍對(duì)受 LM污染的食品不影響 LM的生存活性;不同 PH及鹽濃度生長試驗(yàn)顯示 Ph4-10時(shí)三株 LM均生長良好,ph2-3活菌數(shù)很少,其中 LM1
4、9抗酸性最強(qiáng),食源性 LM最弱,說明食品保存應(yīng)在保證不影響食品品質(zhì)的前提下盡可能選酸性條件保存,制備青貯時(shí)保持在 pH4以下,可控制青貯中 LM的生長;在1-7%濃度鹽環(huán)境中三株 LM生長良好,隨著鹽濃度增大,存活率逐漸下降,其中以 LM90的抗鹽性最強(qiáng),在10%以上鹽濃度下三株 LM趨于不生長,從而間接說明腌制食品受 LM污染的風(fēng)險(xiǎn)較??;在紫外線照射時(shí)間超過90min時(shí)才能完全殺滅 LM,其中以 LM19的抗性最強(qiáng)。因此,紫外線用于微
5、生物實(shí)驗(yàn)超凈工作臺(tái)消毒時(shí),照射時(shí)間最好達(dá)到90min以上。
2、不同來源 LM受不同理化因子作用后其毒力因子變化
三株 LM受溫度為-20℃-72℃處理后均出現(xiàn)β溶血現(xiàn)象;pH2-10的環(huán)境下,三株 LM均出現(xiàn)β溶血圈;在1%-18%鹽濃度時(shí)三株 LM均出現(xiàn)明顯β溶血現(xiàn)象;不同時(shí)間紫外線照射后,食源性 LM和 LM90在0-90min均出現(xiàn)溶血現(xiàn)象,LM19在0-60min出現(xiàn)了溶血圈。磷脂酶試驗(yàn)顯示,三株 LM在-
6、20℃-72℃溫度下、pH2-10及1%-18%鹽濃度時(shí)三株 LM周邊均出現(xiàn)乳白色暈圈現(xiàn)象,顯酶活性陽性反應(yīng),且圈的大小無明顯差異;紫外線照射顯示食源性 LM和 LM90在0-90min時(shí)磷脂酶陽性,LM19在0-60min均為陽性。
3、不同來源 LM受不同理化因子作用后其毒力基因的變化
三株 LM除在100℃不生長外,其余-20℃-72℃生長的細(xì)菌均通過 PCR擴(kuò)增出 hly毒力基因目的片段(743bp)和 pr
7、fA毒力基因目的片段(715bp);在 pH2-10生長的細(xì)菌均通過 PCR擴(kuò)增出 hly和 prfA毒力基因目的片段;鹽濃度在1%-18%下生長的細(xì)菌均通過PCR擴(kuò)增出 hly和 prfA毒力基因目的片段,紫外線照射后均通過 PCR檢測(cè)到 hly和 prfA毒力基因目的片段。
上述研究結(jié)果表明,不同來源 LM在不同理化因子作用后,其生長存活性狀與其主要毒力因子溶血素和磷脂酶變化及毒力基因 Hly和毒力調(diào)控因子 PrfA的表達(dá)
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