溫州地區(qū)原發(fā)性高血壓與線粒體ND1基因變異的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　 1.收集溫州地區(qū)原發(fā)性高血壓患者(Essential Hypertension，EH)的臨床資料，采集其外周血，建立原發(fā)性高血壓臨床資料和線粒體基因組遺傳學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)。
　　 2.開(kāi)展原發(fā)性高血壓患者的線粒體ND1基因變異篩查，繪制該基因突變頻譜。
　　 3.分析線粒體ND1基因變異與原發(fā)性高血壓發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 1.根據(jù)2010年《中國(guó)高血壓防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)，選

2、取溫州地區(qū)漢族人群中無(wú)血緣關(guān)系的1804例原發(fā)性高血壓患者為實(shí)驗(yàn)組和512例健康人群為對(duì)照組，共2316例，收集其臨床資料和外周血標(biāo)本。
　　 2.提取2316例臨床受試對(duì)象的外周血全基因組DNA。
　　 3.采用聚合酶鏈?zhǔn)椒椒?Polymerase Chain Reaction，PCR)特異性擴(kuò)增線粒體ND1基因，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，直接DNA測(cè)序并分析。
　　 4.應(yīng)用生物信息軟件(Codoncode ali

3、gner、Chromas、DNAstar)將測(cè)序結(jié)果與劍橋參考序列（revised Cambridge Reference Sequence，rCRS）比對(duì)，分析線粒體ND1基因變異位點(diǎn)。
　　 5.借助Clustal X軟件和相關(guān)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，分析線粒體ND1基因的變異位點(diǎn)保守性，氨基酸變異情況，SOSUI在線軟件分析蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)改變，并統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析線粒體ND1變異與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性。
　　 6.繪制溫州地區(qū)原

4、發(fā)性高血壓患者線粒體ND1基因突變頻譜。
　　 結(jié)果:
　　 1.實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組臨床資料對(duì)比，兩組之間性別無(wú)顯著性差異(P值=0.338＞0.05);兩組年齡在30-60歲之間占50％。
　　 2.PCR擴(kuò)增1804例實(shí)驗(yàn)組和512例對(duì)照組的線粒體ND1基因，測(cè)序后分析得實(shí)驗(yàn)組有1031例樣本攜帶線粒體ND1變異，對(duì)照組有269例樣本攜帶線粒體ND1變異;兩組間樣本攜帶ND1變異無(wú)顯著差異(P值=0.064＞0.

5、05)。
　　 3.實(shí)驗(yàn)組篩查線粒體ND1基因共有127處變異，其中基因變異頻率為13.39×10-2/bp;對(duì)照組共有77處變異，基因變異頻率為8.05×10-2/bp。兩組間共同篩查得到變異位點(diǎn)共59處，且實(shí)驗(yàn)組基因變異頻率高于對(duì)照組。
　　 4.實(shí)驗(yàn)組ND1基因變異位點(diǎn)中有44處錯(cuò)義突變，83處同義突變;對(duì)照組則有31處錯(cuò)義突變，46處同義突變。
　　 5.實(shí)驗(yàn)組的ND1基因變異累計(jì)總次數(shù)達(dá)1473次，錯(cuò)義

6、突變累計(jì)總次數(shù)達(dá)444次，同義突變累計(jì)總次數(shù)達(dá)1029次;對(duì)照組的ND1基因變異累計(jì)總次數(shù)達(dá)439次，錯(cuò)義突變累計(jì)總次數(shù)達(dá)次123次，同義突變累計(jì)總次數(shù)達(dá)316。兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P值=0.405），但實(shí)驗(yàn)組錯(cuò)義突變累計(jì)次數(shù)所占總次數(shù)的比例高于對(duì)照組。
　　 6.實(shí)驗(yàn)組中錯(cuò)義突變位點(diǎn)的種系發(fā)生分析，保守性分析≥75％共有23處，累計(jì)變異次數(shù)達(dá)128次;對(duì)照組變異位點(diǎn)保守性分析≥75％有11處，累計(jì)變異次數(shù)達(dá)22次;兩組間存在差

7、異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值=0.05）。
　　 7.蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，T4216C，T4226C，A4231G變異使得ND1亞基二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，由8個(gè)跨膜區(qū)變?yōu)?個(gè)跨膜區(qū)。
　　 8.PolyPhen-2蛋白功能預(yù)測(cè)軟件檢測(cè)結(jié)果顯示T3308C、C3364A、G3391A、T3394C、A3593G、T3614A、T3644C、C3746T、A3796G、A4136G變異均對(duì)ND1亞基造成功能性的損害。