多色探針熔解曲線分析技術(shù)在代謝酶相關(guān)基因突變檢測(cè)中的研究和應(yīng)用.pdf

1、作為均相突變檢測(cè)技術(shù)，多色探針熔解曲線分析技術(shù)因具有快速簡(jiǎn)便、靈敏特異、高通量、低成本等優(yōu)點(diǎn)，自本實(shí)驗(yàn)室提出以來(lái)，正越來(lái)越多地用于分子診斷領(lǐng)域。本論文將多色探針熔解曲線分析技術(shù)應(yīng)用于葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(Glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD)常見(jiàn)基因突變的檢測(cè)和華法林(Warfarin)、氯吡格雷(Clopidogrel)常見(jiàn)藥物敏感性SNP位點(diǎn)的多態(tài)性分析，全面考察該技術(shù)檢測(cè)多種突變的能力。<

2、br>　　 第一章，闡述基因突變與人類(lèi)疾病以及基因多態(tài)性與藥物代謝之間的重大關(guān)系，并介紹現(xiàn)有基因突變檢測(cè)及基因多態(tài)性分析的分子生物學(xué)方法及其各自的優(yōu)缺點(diǎn)，隨后提出本論文的檢測(cè)對(duì)象、檢測(cè)目標(biāo)和研究意義。
　　 第二章，概述G6PD缺乏癥的發(fā)現(xiàn)及其分子機(jī)制，并且介紹了臨床最常用的生化檢測(cè)方法及其優(yōu)缺點(diǎn)，同時(shí)總結(jié)了目前G6PD缺乏癥基因診斷的研究進(jìn)展。隨后，根據(jù)中國(guó)地區(qū)G6PD缺乏癥各突變類(lèi)型的發(fā)生頻率，利用多色探針熔解曲線分析技術(shù)

3、建立了兩管三色的突變檢測(cè)體系，實(shí)現(xiàn)了對(duì)中國(guó)人群常見(jiàn)的17個(gè)G6PD基因的突變位點(diǎn)或多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)和基因分型。該體系的檢測(cè)限達(dá)50 pg/反應(yīng)，同時(shí)，對(duì)763份臨床標(biāo)本進(jìn)行了雙盲測(cè)試，選取與臨床生化檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本128例進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有10例發(fā)生本體系檢測(cè)范圍之外的突變，其余118例均與測(cè)序結(jié)果一致，特異性達(dá)100％。與臨床使用的生化檢測(cè)方法相比，本技術(shù)大大提高了對(duì)女性雜合子的檢出率，適用于大規(guī)模的人群篩查。

4、　　 第三章，對(duì)藥物基因組學(xué)的研究進(jìn)展及其應(yīng)用進(jìn)行綜述，以臨床研究較多的華法林和氯吡格雷為研究對(duì)象，利用多色探針熔解曲線分析技術(shù)檢測(cè)其藥物靶標(biāo)基因常見(jiàn)的SNP位點(diǎn)，建立了兩個(gè)單管四色檢測(cè)體系，其中一管檢測(cè)華法林靶標(biāo)基因常見(jiàn)的4個(gè)SNP位點(diǎn)，另一管檢測(cè)氯吡格雷靶標(biāo)基因常見(jiàn)的4個(gè)SNP位點(diǎn)。通過(guò)對(duì)兩個(gè)體系檢測(cè)靈敏度的考察和人類(lèi)基因組DNA的檢測(cè)，驗(yàn)證了該體系進(jìn)行基因SNP位點(diǎn)分析的準(zhǔn)確性和有效性，其檢測(cè)限達(dá)50 pg/反應(yīng)，特異性達(dá)100