18F-Annexin B1 PET-CT凋亡分子影像早期評(píng)價(jià)腫瘤化療療效的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分18F-Annexin B1在正常動(dòng)物體內(nèi)生物分布
　　目的:磷脂酰絲氨酸(phospatidylserine，PS)由細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面，是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)的初始事件。膜聯(lián)蛋白B1(Annexin B1)是一種新型細(xì)胞凋亡檢測(cè)蛋白，在鈣離子存在的條件下與PS具有很高的親和力。因此，利用Annexin B1高度親和PS可以早期檢測(cè)凋亡的發(fā)生。本研究的目的是對(duì)18F-Annexin B1的體內(nèi)生物分布情況進(jìn)行評(píng)價(jià)與分

2、析，為進(jìn)一步研究18F-Annexin B1探測(cè)化療后腫瘤細(xì)胞凋亡提供生物分布基礎(chǔ)。
　　方法:以N-琥珀酰亞胺-4-[18F]氟苯甲酸酯(N-succinimidyl-4-[18F]fluorobenzoate，SFB)作為中間體將18F標(biāo)記到Annexin B1上，從而獲得新型細(xì)胞細(xì)胞凋亡分子顯像探針18F-Annexin B1。檢測(cè)18F-Annexin B1的標(biāo)記率、放射化學(xué)純度和穩(wěn)定性。生物分布實(shí)驗(yàn)分兩部分進(jìn)行，第一部分

3、:昆明小鼠經(jīng)尾靜脈注射18F-AnnexinB1，分別于注射后30min、60min、120min和240min將小鼠處死，取各主要臟器稱重、測(cè)定放射性計(jì)數(shù)，并計(jì)算每克組織注射百分率(％ID/g)。第二部分:SD大鼠經(jīng)尾靜脈注射18F-Annexin B1，分別于注射后10min、20min、30min、60min、90min、120min和240min進(jìn)行PET/CT多時(shí)相靜態(tài)顯像。利用Syngo平臺(tái)3D軟件處理圖像，觀察顯像劑在大鼠

4、體內(nèi)代謝情況。
　　結(jié)果:分子顯像探針18F-Annexin B1的放射化學(xué)純度＞95％，經(jīng)HPLC檢測(cè)在小牛血清和PBS體系內(nèi)（3個(gè)半衰期）均具有良好的穩(wěn)定性，標(biāo)記率為20％～30％。正常昆明小鼠體內(nèi)分布結(jié)果可見腎臟放射性分布最高，各時(shí)相放射性分別為(1.5425±1.2006)％ID/g、(0.2410±0.1411)％ID/g、(0.2236±0.2367)％ID/g和(0.0646±0.0484)％ID/g，其次分別為肝臟

5、、脾臟及心肌，腦組織內(nèi)放射性分組最低，其余臟器各時(shí)間點(diǎn)放射性分布變化不明顯。正常SD大鼠PET/CT顯像結(jié)果顯示，顯像劑首先經(jīng)過肝臟代謝，而后通過泌尿系統(tǒng)排泄，120min時(shí)肝臟、腎臟本底可降至較低水平。
　　結(jié)論:本研究結(jié)果表明，18F-Annexin B1在正常小鼠、大鼠體內(nèi)均有較快的血液清除速率，主要經(jīng)肝臟代謝、泌尿系統(tǒng)排泄。與文獻(xiàn)報(bào)道相比，其在體內(nèi)的放射性分布情況與18F-AnnexinⅤ基本相仿，而明顯低于99mTc-a

6、nnexin B1。
　　第二部分18F-Annexin B1 PET/CT顯像探測(cè)單次化療后荷瘤大鼠腫瘤細(xì)胞凋亡
　　目的：化療是治療惡性腫瘤最常用的方法之一，其作用的主要形式不是細(xì)胞被動(dòng)死亡，而是細(xì)胞主動(dòng)地發(fā)生凋亡?；铙w凋亡顯像能夠早期、無創(chuàng)、動(dòng)態(tài)地監(jiān)測(cè)腫瘤細(xì)胞治療后的凋亡情況，準(zhǔn)確地了解腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的反應(yīng)，指導(dǎo)臨床醫(yī)生及時(shí)調(diào)整治療方案，避免盲目的無效治療，為臨床個(gè)體化治療方案的制定提供指導(dǎo)性意見。本研究的目的在于

7、探討活體細(xì)胞凋亡顯像探針18F-Annexin B1在腫瘤動(dòng)物模型中對(duì)化療療效早期評(píng)價(jià)的可行性，為進(jìn)一步臨床應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：建立Walker-256荷瘤大鼠模型，待瘤體長(zhǎng)至1cm時(shí)隨機(jī)分為A、B兩組，A組給予腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX，200mg/kg)，B組予腹腔注射等體積生理鹽水。24h后靜脈注射18F-Annexin B1，分別于注射后1h、2h、3h和4h進(jìn)行PET/CT多時(shí)相靜態(tài)顯像。圖像分析采用Syngo平

8、臺(tái)True D軟件處理，利用感興趣區(qū)(ROI)技術(shù)勾畫腫瘤和對(duì)側(cè)正常肌肉組織，獲得二者SUVmax，并計(jì)算腫瘤/正常肌肉SUVmax比值(T/NT)。顯像結(jié)束后將腫瘤組織制成5μ厚的病理石蠟切片，用HE染色法和原位缺口末端標(biāo)記(TUNEL)染色法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡情況，并根據(jù)TUNEL染色圖片計(jì)算凋亡指數(shù)(AI)，以AI反映腫瘤凋亡情況。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SSPS17.0軟件，組間比較采用單因素方差分析，T/NT與AI做直線相關(guān)分析。

9、　　結(jié)果：兩組荷瘤鼠靜脈注射顯像劑后各時(shí)相腫瘤均見顯影，但A組各時(shí)相T/NT均明顯高于B組，各時(shí)間點(diǎn)(1h，2h，3h，and4h) T/NT比值分別為:A組(4.38±0.56、6.75±1.16、6.44±1.12和4.81±0.17)和B組(2.35±0.14、2.99±0.55、3.04±0.41和2.33±0.47)，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F值分別為23.790、16.913、14.046和77.517，P均＜0.05）。A

10、組HE染色切片光鏡下可見較多凋亡小體， TUNEL染色切片光鏡下亦可證實(shí)化療可以明顯提高腫瘤細(xì)胞凋亡數(shù)量，且兩種染色方法下所觀察到的凋亡細(xì)胞均高于B組，TUNEL法AI分別為(21.00±0.04)％和(8.58±0.01)％，兩組差異顯著(F=21.539，P＜0.05)。T/NT值與AI間有很好的相關(guān)性(r=0.91，P＜0.05)。另從肉眼觀察角度即腫瘤組織放射性攝取程度來看，1h時(shí)的腫瘤即可顯影清晰。
　　結(jié)論:化療能夠引