禽痘病毒疫苗及野毒株重組禽網狀內皮組織增生病病毒的研究.pdf

1、禽痘(Avian pox，AP)是由痘病毒科、脊椎動物痘病毒亞科、禽痘病毒屬中的禽痘病毒引起的家禽的一種急性、接觸性傳染病。禽網狀內皮組織增殖病(reticuloendotheliosis，RE)是由反轉錄病毒科的禽網內皮組織增殖病病毒(reticuloendotheliosis virus，REV)引起的幾種禽類的一群病理綜合征，REV基因片段整合迸FPV疫苗、基因片段甚至完整的基因組整合進FPV野毒株已成為普遍現(xiàn)象。研究表明，隨著F

2、PV和REV整合的不斷發(fā)展，其對于痘病毒的增殖和感染都有促進作用。而且這種整合對FPV的生物特性產生很大影響，其中最明顯的表現(xiàn)為FPV疫苗保護力的下降;野毒致病力的增強等。
　　本研究通過對2012-2014年國內外不同地區(qū)、不同批次的12個FPV疫苗株以及來自泰安某地區(qū)的3個火雞痘及1個雞痘野毒株中整合REV進行分離鑒定及其序列比較，以評估國內外當前使用FPV疫苗的缺陷、潛在風險以及FPV中REV的污染狀況。
　　12個禽

3、痘疫苗株接種CEF傳代至出現(xiàn)明顯的細胞病變，提取細胞DNA，根據(jù)已發(fā)表的整合序列，PCR擴增FPV-REV5'LTR整合區(qū)，同時分段擴增REV的LTR、Env、Gag、Pol序列，結果表明，12個禽痘疫苗株均擴增出含REV5'LTR和FPV片段在內的產物，但未擴增到REV的Env、Gag、Pol序列。對FPV-REV5'LTR整合區(qū)序列進行測定，經NCBI、DNA-star比對分析，其中2個國外疫苗株整合了446bp的REV-LTR序列

4、，與中國近年分離到的REV野毒株HA9901的同源性為98％，與美國標準株SNV的同源性為94.3％;另外10個國內疫苗株整合的REV LTR片段相對較小，僅為194bp，與中國近年分離到的REV野毒株HA1101、HA9901的同源性分別為98.4％和96.4％，與美國標準株SNV的同源性為94.3％。10個國內疫苗株整合區(qū)與國外已發(fā)表的禽痘毒株AY255632、HP-438的同源性分別為98.6％和100％，2個國外疫苗株整合區(qū)與A

5、Y255632的同源性達到100％。結果表明所檢測的12個禽痘疫苗株只整合部分REV LTR序列，并且與REV的分離株同源性不高，但與國外禽痘分離株整合區(qū)的同源性較高。
　　分離到的3個火雞痘與1個雞痘野毒株經雞胚連續(xù)傳代至出現(xiàn)痘斑，研磨后接種CEF傳代至出現(xiàn)CPE，提取細胞DNA，結果除擴增到485bp的FPV-REV5'LTR整合區(qū)以外，同時擴增到REV的Env基因(1700bp)、Gag基因(2050bp)及Pol基因(34

6、50bp)。序列分析表明，4個野毒株的FPV-REV5'LTR整合區(qū)同源性達99.8％-100％，且與國內疫苗株的整合區(qū)高度同源。同時選取T1毒株人工感染20只SPF雞，使用ELISA方法檢測血清中REV抗體，攻毒前REV抗體陽性率為0％(0/20)，攻毒兩周后陽性率為100％(20/20)。剖檢發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)免疫器官及其他器官的病變，包法氏囊萎縮出血，胸腺萎縮出血，氣管出血并伴有粘液，腎臟腫大等癥狀，可能與FPV野毒中的REV有關，但還需進