Ghrelin在蒙古綿羊卵泡顆粒細(xì)胞及其擬黃體化過程中的表達(dá).pdf

1、Ghrelin是1999年由日本科學(xué)家Kojima從大鼠胃中分離出來，是生長激素促分泌素受體(GHS-R)的天然配體，被認(rèn)為是一種腦腸肽。 目前，Ghrelin蛋白在綿羊卵泡顆粒細(xì)胞中表達(dá)已被充分肯定，但是Ghrelin mRNA在顆粒細(xì)胞中的表達(dá)一直未見報導(dǎo)，鑒于顆粒細(xì)胞可能在卵泡發(fā)育過程中對卵母細(xì)胞有積極作用，且排卵后顆粒細(xì)胞為黃體細(xì)胞主要前身，本研究應(yīng)用RT-PCR方法、實時熒光定量RT-PCR技術(shù)，以及體外成熟培養(yǎng)技術(shù)和

2、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)系統(tǒng)的研究了顆粒細(xì)胞Ghrelin mRNA的表達(dá)情況，具體結(jié)果如下: 1.應(yīng)用RT-PCR技術(shù)，從蒙古綿羊卵泡顆粒細(xì)胞中成功獲得Ghrelin部分基因片段(233bp)，經(jīng)序列測定和基因序列分析確認(rèn)該產(chǎn)物為Ghrelin eDNA，并且該eDNA包含231bp的開放讀碼框(ORF)，該ORF編碼77個氨基酸的綿羊Ghrelin前原肽。首次證實了Ghrelin mRNA在蒙古綿羊卵泡顆粒細(xì)胞存在。 2.實時熒

3、光定量RT-PCR結(jié)果表明，Ghrelin mRNA相對表達(dá)量在大卵泡(3-5ram)的卵丘細(xì)胞和壁層顆粒細(xì)胞中無顯著差異。 3.卵丘細(xì)胞Ghrelin mRNA相對表達(dá)量在不同成熟培養(yǎng)時間及成熟過程中在LH、FSH和E2單一激素刺激下都是逐漸降低的。 4.初步探討了體外培養(yǎng)條件下顆粒細(xì)胞擬黃體化過程中Ghrelin mRNA的表達(dá)情況，結(jié)果表明，穩(wěn)定生長的顆粒細(xì)胞Ghrelin mRNA相對表達(dá)量在前6d無顯著變化，但