gp78蛋白在腫瘤組織中的表達分析及功能研究.pdf

1、分類號：R73021密級：學位類別：科學學位團專業(yè)學位口◇學校代碼：10062學號：2010602028學科門類：理學又肄醬科矢垮Tl矗NlIN醚￡OleALUNlVERSITY碩士學位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：gp78蛋白在腫瘤組織中的表達分析及功能研究TITLETheexpressionandfunctionalanalysisofgp78intumortissues一級學科：生物學二級學科：生物化學與分

2、子生物學論文作者：尚永亮指導教師：朱爭艷導師組成員：天津醫(yī)科大學研究生院二O一三年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中又豐葡晏研究目的：探索泛素連接酶E3(UbiquitinE3ligase)gp78在睪丸癌、卵巢癌、結腸癌、前列腺癌等中的表達情況，以期建立gp78表達與上述腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關系，并評價其作為潛在的腫瘤分子標志物的可能性，為腫瘤早期診斷、腫瘤分子分型及個體化醫(yī)療提供基礎。最后，研究gp78參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的可能機制。研究方法

3、：購買商業(yè)化的睪丸癌組織芯片、卵巢癌組織芯片、結腸癌組織芯片和前列腺癌組織芯片，根據其高通量，高密度，廣泛代表性的特點，利用免疫組織化學染色方法對上述腫瘤組織中gp78的表達進行分析。利用芯片中的正常組織作為對照，分別統(tǒng)計芯片中正常組織和腫瘤組織中gp78的表達量和表達陽性率。進一步對芯片中腫瘤組織的病理資料如腫瘤分期、病例年齡、生存率等資料與gp78的表達率進行相關性分析，探索gp78表達的病理特征，建立gp78與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的相關

4、性，評價其作為潛在的腫瘤分子標志物的可能性。最后利用基因敲除技術，以結腸癌細胞系HCTll6為模式對象，建立野生型細胞系HCTll6WT和gp78敲除細胞系一HCTl16gp78KO，通過酶譜分析檢測gp78敲除前后細胞表達基質金屬蛋A酶(matrixmatalloproteinase，MMPs)MMP2和MMP9的差異。進而探索gp78參與腫瘤遷移的可能機制。研究結果：1免疫組織化學染色結果發(fā)現，gp78在人正常睪丸組織中和睪丸癌的組

5、織中均有表達，其中正常組織中gp78的陽性率達到40％，而在所有腫瘤組織中gp78陽性率則為49％。2卵巢癌中免疫組化染色發(fā)現，卵巢正常組織中葉存在gp78蛋白的表達，其陽性率為22％，而腫瘤組織的平均陽性率為39％。3在結腸癌組織芯片中，所有正常結腸組織均未發(fā)現gp78的陽性染色信號，而結腸癌組織中gp78染色的陽性率為70％。4前列腺癌芯片的免疫組化結果提供了最為明顯的結果，在全部23個正常組織中均未檢測到gp78蛋白的表達，在腫瘤

6、組織中gp78的陽性率為50％。而且，在gp78陽性的組織中gp78蛋A的表達是非均一的，一部分組織表達于前列腺基細胞中，而另一部分組織表達于前列腺間質細胞中，二者比例接近。5利用westemblotting免疫印跡技術和免疫熒光染色檢測試驗所用的HCTl16野生型細胞HCTl16WT和gp78敲除細胞系gp78KO，發(fā)現gp78KO細胞系中沒有檢測到gp78蛋白的表達，而HCTll6WT細胞系中有正常的gp78的表達，說明我們利用的細