PLA2G6 SNPs與PD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性研究及PLA2G6酶活性下降導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、研究背景:PLA2G6基因位于22q13.1，其編碼的蛋白質(zhì)稱為iPLA2 VIA或iPLA2β，此基因?qū)е翽D的發(fā)病機(jī)制尚無(wú)報(bào)道。iPLA2β是磷脂酶A2(PLA2)的一種，對(duì)于維持膜的流動(dòng)性具有重要的作用。
　　研究目的:本部分實(shí)驗(yàn)主要研究iPLA2β酶活性下降是否通過(guò)損傷線粒體而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
　　研究方法:本部分主要運(yùn)用了MTT實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)，電鏡觀察、Western Blots實(shí)驗(yàn)等檢測(cè)了與線粒體及細(xì)胞凋亡

2、相關(guān)的指標(biāo)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同濃度S-BEL預(yù)孵育SH-SY5Y細(xì)胞可導(dǎo)致細(xì)胞活性出現(xiàn)不同程度的下降。2.運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)不同濃度S-BEL預(yù)孵育SH-SY5Y細(xì)胞可以導(dǎo)致線粒體膜電位下降。3.運(yùn)用電鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)不同濃度S-BEL預(yù)孵育SH-SY5Y細(xì)胞可以導(dǎo)致線粒體形態(tài)發(fā)生改變及細(xì)胞核固縮等改變。4.Western Blots檢測(cè)發(fā)現(xiàn)不同濃度S-BEL預(yù)孵育細(xì)胞可以導(dǎo)致SH-SY5Y細(xì)胞線粒體細(xì)胞色素C釋

3、放入細(xì)胞漿內(nèi)。5.Western Blots檢測(cè)發(fā)現(xiàn)不同濃度S-BEL預(yù)孵育細(xì)胞可以導(dǎo)致SH-SY5Y細(xì)胞caspase9、caspase3活化。6.運(yùn)用Annexin-PI檢測(cè)發(fā)現(xiàn)不同濃度S-BEL預(yù)孵育細(xì)胞均可以導(dǎo)致SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論:iPLA2β酶活性下降可以通過(guò)線粒體途徑導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。當(dāng)然本部分實(shí)驗(yàn)僅是細(xì)胞水平的研究，進(jìn)一步的動(dòng)物模型仍在構(gòu)建中。
　　研究背景:PLA2G6基因突變可導(dǎo)致嬰兒神

4、經(jīng)軸索變性病(INAD，infantile neuroaxonal dystrophy)及常染色體隱性遺傳性PD，因?yàn)椴糠諭NAD病人和常染色體隱性遺傳性早發(fā)性帕金森綜合征患者在MRI上腦內(nèi)蒼白球區(qū)域可見(jiàn)鐵離子沉積，因此也被稱作腦內(nèi)鐵離子沉積性疾病-2型(Neurodegenerative disorders with brain ironaccumulation，NBIA-2)。散發(fā)性PD病人腦內(nèi)黑質(zhì)(SN)區(qū)域的鐵水平增高已被證實(shí)，

5、且已被證明為散發(fā)性PD的重要發(fā)病原因之一。鐵離子增高可以導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧水平增高、加重線粒體的損傷從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
　　研究目的:本部分主要研究iPLA2β酶活性下降是否會(huì)導(dǎo)致鐵離子沉積、鐵離子代謝障礙從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。
　　研究方法:本部分主要運(yùn)用Perls鐵染色方法觀察是否存在鐵離子沉積、運(yùn)用Western Blots方法觀察鐵離子代謝相關(guān)蛋白的變化。
　　研究結(jié)果:1.運(yùn)用Perls鐵染色方法發(fā)現(xiàn)不同濃度

6、S-BEL孵育SH-SY5Y細(xì)胞并不能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鐵離子沉積。2.對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞預(yù)孵育鐵離子螯合劑去鐵敏，并不能降低S-BEL孵育所導(dǎo)致的caspase3活化帶的表達(dá)。3.不同濃度S-BEL孵育SH-SY5Y細(xì)胞并不能導(dǎo)致鐵離子轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白的表達(dá)調(diào)控發(fā)生障礙。4.不同濃度S-BEL孵育Neuro2a細(xì)胞并不能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鐵離子沉積。5.對(duì)Neuro2a細(xì)胞預(yù)孵育鐵離子螯合劑去鐵敏，并不能改變S-BEL孵育所導(dǎo)致的細(xì)胞存活率下降。6.運(yùn)