NF-κB和Th-,1--Th-,2- CK在哮喘小鼠模型中的表達(dá)和T-α、Dex干預(yù)作用的研究.pdf

1、一、背景和目的： 支氣管哮喘是由嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)、淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、單核細(xì)胞等多種細(xì)胞和細(xì)胞組分廣泛參與的慢性氣道炎癥性疾病。NF-κB是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種廣泛存在的多效性轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白，參與調(diào)控轉(zhuǎn)錄眾多細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的表達(dá)，與多種炎癥性疾病密切相關(guān)。它是有關(guān)炎癥病理過(guò)程中許多炎性介質(zhì)表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子，在啟動(dòng)、放大和延續(xù)炎癥反應(yīng)過(guò)程中起中樞性調(diào)節(jié)作用。Th1/Th2平衡在免疫調(diào)節(jié)中起重要作用，支氣管哮喘患者存在著

2、T細(xì)胞由Th1向Th2的優(yōu)勢(shì)轉(zhuǎn)化或漂移，這種優(yōu)勢(shì)的Th2免疫在哮喘的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。其中Th2產(chǎn)生的IL-4、IL-5被認(rèn)為是關(guān)鍵的細(xì)胞因子。IL-4是Th2的特征性細(xì)胞因子，它可以選擇性地誘導(dǎo)、促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生IgE；IL-5可以促進(jìn)氣道內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞的募集、浸潤(rùn)和活化。IFN-γ是Th1的特征性細(xì)胞因子，它可以有效地活化單核巨噬細(xì)胞，促進(jìn)其殺傷力。IFN-γ和IL-4是一對(duì)相互拮抗而又自身促進(jìn)的細(xì)胞因子，它們分別是Th1、Th2

3、細(xì)胞因子的代表。 胸腺素-α作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，可以維持機(jī)體處于免疫平衡狀態(tài)，促進(jìn)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ和IL-2的能力。哮喘患者存在著Th1/Th2平衡破壞，Th1向Th2漂移。理論上推測(cè)，胸腺素-α對(duì)于哮喘具有重要的治療價(jià)值。地塞米松作為一種長(zhǎng)效糖皮質(zhì)激素，是一種重要的免疫抑制劑。它作為經(jīng)典的治療支氣管哮喘的藥物是非常有效的，目前仍為治療支氣管哮喘的首選藥物。 該組研究旨在觀察NF-κB和Th1/Th2細(xì)胞因子在哮喘

4、小鼠模型中的表達(dá)，探討其在哮喘發(fā)病過(guò)程中的作用；以及胸腺素-α、地塞米松干預(yù)作用下哮喘小鼠以上各指標(biāo)的變化及其臨床應(yīng)用價(jià)值。 二、材料和方法： 1、雄性BALB/c小鼠28只，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為SPF級(jí)小鼠。隨機(jī)分為4組，每組7只，分別為正常對(duì)照組，哮喘模型組，胸腺素干預(yù)組，地塞米松干預(yù)組。 2、正常組用NS0、5ML于第0天、7天、14天腹腔內(nèi)注射。哮喘組與干預(yù)組分別于0天、7天、14天分次腹腔內(nèi)注射混懸液0、5ML(

5、2mgAL(OH)3乳化的OVA10μg)以致敏。所有動(dòng)物于第15、16、17天用2％OVA溶液霧化吸入以進(jìn)行氣道激發(fā)。胸腺素干預(yù)組自0天起給予胸腺素-α隔日腹腔皮下注射。地塞米松干預(yù)組于第15、16、17天在激發(fā)前給予地塞米松霧化吸入。 3、第18天行支氣管肺泡灌洗，留取支氣管肺泡灌洗液(BALF)。然后取支氣管肺組織。 4、用ELISA法測(cè)BALF上清液中IL-4、IL-5和IFN-γ的水平，用免疫組織化學(xué)方法測(cè)支氣

6、管肺組織中NF-κB的活性。 5、比較各組NF-κB活性和細(xì)胞因子的水平，并運(yùn)用SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 三、結(jié)果： 1、四組BALF中細(xì)胞分類與計(jì)數(shù)的比較 哮喘組的EOS、淋巴細(xì)胞與正常組水平相比，有顯著性差異(P＜0、05)。胸腺素組的EOS與哮喘組水平相比，有顯著性差異(P＜0、05)。胸腺素組的淋巴細(xì)胞與正常組水平相比，有顯著性差異(P＜0、05)。地塞米松組的EOS、淋巴細(xì)胞與哮喘組水平相比，有

7、顯著性差異(P＜0、05)。地塞米松組的EOS、淋巴細(xì)胞與正常組水平相比，無(wú)顯著性差異(P＞0、05)。兩干預(yù)組間的EOS、淋巴細(xì)胞無(wú)顯著性差異(P＞0、05)。 2、正常組、哮喘組、胸腺素組、地塞米松組之間BALF細(xì)胞因子量的比較哮喘組的IL-4、IL-5與正常組水平相比，有顯著性差異(P＜0、05)。哮喘組的IFN-γ與與正常組水平相比，無(wú)顯著性差異(P＞0、05)。胸腺素組的IL-4、IL-5、IFN-γ與哮喘組水平相比，

8、有顯著性差異(P＜0、05)。胸腺素組的IL-4與正常組水平相比，無(wú)顯著性差異(P＞0、05)。胸腺素組的IL-5、IFN-γ與正常組水平相比，有顯著性差異(P＜0、05)。地塞米松組的IL-4、IL-5、IFN-γ與哮喘組水平相比，有顯著性差異(P＜0、01)。地塞米松組的IL-4與胸腺素組水平相比，無(wú)顯著性差異(P＞0、05)。地塞米松組的IL-5、IFN-γ與胸腺素組水平相比，有顯著性差異(P＜0、05)。地塞米松組的IL-4、I

9、L-5、IFN-γ與正常組水平相比，有顯著性差異(P＜0、05)。胸腺肽組與地塞米松組間IL-4/IFN-γ相比，無(wú)顯著性差異(P＜0、05)。余每?jī)蓛山M之間的IL-4/IFN-γ水平相比，有顯著性差異(P＜0、05)。 3、正常組、哮喘組、胸腺素組、地塞米松組之間的NF-κB免疫組化陽(yáng)性率的比較 哮喘組的NF-κB的P65、P50與正常組水平相比，有顯著性差異(P＜0、05)。胸腺素組的NF-κB的P65、P50與哮喘

10、組水平相比，有顯著性差異(P＜0、05)。胸腺素組的NF-κB的P65、P50與正常組水平相比，無(wú)顯著性差異(P＞0、05)。地塞米松組的NF-κB的P65、P50與哮喘組水平相比，有顯著性差異(P＜0、05)。地塞米松組的NF-κB的P65、P50與正常組水平相比，無(wú)顯著性差異(P＞0、05)。地塞米松組的NF-κB的P65、P50與胸腺素組水平相比，無(wú)顯著性差異(P＞0、05)。 4、細(xì)胞因子與NF-κB陽(yáng)性率的相關(guān)性

11、 IL-4、IL-5的水平與NF-κB陽(yáng)性率的相關(guān)系數(shù)為0.96171-0.97393，有顯著相關(guān)(P＜0、01)。IFN-γ的的水平與NF-κB陽(yáng)性率無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0、05)。 四、結(jié)論： 1、Th1/Th2免疫平衡破壞，T細(xì)胞向Th2方向偏移，Th2優(yōu)勢(shì)反應(yīng)在哮喘的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。 2、哮喘組的支氣管肺組織中NF-κB活性明顯高于正常組，提示在哮喘氣道炎癥的形成過(guò)程中NF-κB的激活起重要作用。

12、 3、哮喘組中，NF-κB活性增強(qiáng)，IL-4、IL-5水平上升，IFN-γ水平下降，IL-4/IFN-γ升高，NF-κB與Th2相關(guān)細(xì)胞因子呈正相關(guān)。 4、胸腺素-α可抑制NF-κB的活性，降低IL-4的水平，明顯提高IFN-γ的水平，調(diào)節(jié)Th1/Th2間的平衡，在哮喘的治療中具有一定的價(jià)值。 5、地塞米松作為治療支氣管哮喘的經(jīng)典藥物，可以抑制NF-κB的活性，促進(jìn)淋巴細(xì)胞凋亡，明顯降低IL-4、IL-5細(xì)胞因子的