哮喘巨噬細(xì)胞對Th失衡的影響及茶堿干預(yù)作用的體外研究.pdf

1、目的：(1)在重組人粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)作用下體外誘導(dǎo)培養(yǎng)人外周血單核源性巨噬細(xì)胞，并進(jìn)行鑒定和功能檢測。(2)探討巨噬細(xì)胞對哮喘兒童Th細(xì)胞亞群(Th1/Th2)功能的影響，以及茶堿的調(diào)節(jié)作用。 方法：(1)貼壁法分離人外周血單核細(xì)胞，用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基和rhGM-CSF培養(yǎng)7天。光鏡、掃描電鏡及透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，雞紅細(xì)胞吞噬試驗檢測吞噬功能，流式細(xì)胞術(shù)檢測單核巨噬細(xì)胞表面特

2、征性標(biāo)志CD14等生物學(xué)技術(shù)鑒定貼壁細(xì)胞性質(zhì)。(2)培養(yǎng)哮喘兒童單核源性巨噬細(xì)胞。分兩組：抗原提呈組和茶堿干預(yù)組，茶堿干預(yù)組在培養(yǎng)過程中加入氨茶堿。兩組巨噬細(xì)胞體外抗原活化后再與自體淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)3天，另設(shè)不參與反應(yīng)的自身淋巴細(xì)胞對照組。流式細(xì)胞儀檢測3組CD4+T細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4水平，RT-PCR檢測淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子T-bet和GATA-3mRNA表達(dá)。 結(jié)果：(1)獲得的貼壁細(xì)胞具備巨噬細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征

3、及免疫表型，有吞噬功能，純度較高。(2)與自身對照組和抗原提呈組相比，茶堿干預(yù)組淋巴細(xì)胞胞內(nèi)IL-4水平和GATA-3 mRNA表達(dá)顯著降低(P＜0.05)，IFN-γ/IL-4和T-bet/GATA-3比例明顯升高(P＜0.05)。抗原提呈組與自身對照組相比，各指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異。3組間IFN-γ水平和T-bet mRNA表達(dá)無顯著改變。 結(jié)論：(1)人外周血單核細(xì)胞在rhGM-CSF誘導(dǎo)下向巨噬細(xì)胞分化，具有生物學(xué)活性，純度較