全反式視黃酸對結(jié)腸癌HCT-15細(xì)胞生長抑制效應(yīng)的蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、結(jié)腸癌是各類癌癥中發(fā)病率較高的的一種疾病,在中國,結(jié)腸癌發(fā)病率已上升到第五位,且近年來發(fā)病率呈上升趨勢。視黃酸(Retinoic acids)是維生素A在人體內(nèi)的最重要的代謝產(chǎn)物,具有重要的生理功能,參與調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡、免疫反應(yīng)和發(fā)育等重要生物學(xué)過程。體內(nèi)、外研究結(jié)果表明視黃酸能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖,這一性質(zhì)使得視黃酸成為抗癌藥物的候選者之一。全反式視黃酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是視黃酸

2、的異構(gòu)體之一,可抑制結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT-15的增殖。本文選取HCT-15細(xì)胞作為研究對象,從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度來進(jìn)一步了解全反式視黃酸對HCT-15的抑制機(jī)制,以進(jìn)一步闡明視黃酸信號通路以及該信號通路在結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖抑制中所起的作用。
　　 本文通過MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)法測定全反式視黃酸作用后的細(xì)胞增殖抑制情況和利用光學(xué)

3、顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化,結(jié)果表明全反式視黃酸可抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-15的增殖。誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞分化的標(biāo)志性蛋白堿性磷酸酶活性檢測結(jié)果表明全反式視黃酸不能誘導(dǎo)HCT-15細(xì)胞的分化,DNA ladder檢測及熒光染料染色觀察表明全反式視黃酸可誘導(dǎo)HCT-15的細(xì)胞凋亡。對全反式視黃酸作用前后的HCT-15細(xì)胞進(jìn)行雙向電泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分析,得到19個差異表達(dá)的蛋白質(zhì),通過MAL

4、DI-FOF-TOF MS(matrix-associated laser desorption/ionization-timeof flight-time of flight mass spectrum)鑒定出13個在全反式視黃酸下差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。其中4個為支架蛋白(YWHAE、SFN、YWHAB和YWHAZ),2個為與泛素化修飾有關(guān)蛋白(ISG-15和UBE2N),2個為翻譯起始因子(EIF1AX和EIF3K),2為細(xì)胞骨架相關(guān)蛋

5、白(EZRJ和CNN3),2個為蛋白質(zhì)修飾有關(guān)的蛋白(TXNDC17和PIMT),1個為代謝有關(guān)的酶(PSP)。
　　 根據(jù)這些蛋白質(zhì)在其參與的生命活動過程中的功能,本文選擇了EZRI和UBE2N兩種蛋白質(zhì),通過免疫印跡法對蛋白質(zhì)表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證。免疫印跡驗(yàn)證的蛋白質(zhì)表達(dá)量變化情況與2-DE圖譜分析結(jié)果一致。
　　 本文利用ATRA處理結(jié)腸癌細(xì)胞系:HCT-15,鑒定出差異表達(dá)的蛋白質(zhì)將有助于進(jìn)一步闡明視黃酸信號通路以及