雷公藤紅素抑制結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞生長及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分、雷公藤紅素抑制結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞生長及其機(jī)制的研究 目的：研究雷公藤紅素(celastrol，CSL)對結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞體外生長和凋亡的影響，并初步探討可能的作用機(jī)制。 方法：采用不同濃度(0.875-7.OumoVL) CSL處理結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞，四氮唑藍(lán)(MTT)法檢測CSL對HCT-116細(xì)胞的生長抑制效應(yīng)，流式細(xì)胞術(shù)(FCM)、透射電鏡觀察CSL對細(xì)胞周

2、期變化和凋亡的誘導(dǎo)作用，熒光底物法測定細(xì)胞蛋白酶體活性改變，免疫印跡法( Western blot)檢測P27、Bax、P53蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：(1) MTT法顯示一定濃度的CSL可以抑制HCT-116細(xì)胞的生長，并隨著濃度的增加和作用時間的延長而明顯增強(qiáng)(P<0.05)。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測HCT-116細(xì)胞經(jīng)CSL作用24h后，細(xì)胞周期G0/G1期細(xì)胞比例上升，G2/M期細(xì)胞比例下降，細(xì)胞有明顯凋亡，并呈現(xiàn)濃度依賴性(P<

3、0.05)。(3)逶射電鏡結(jié)果顯示，7.Oy.mol/L CSL作用于HCT-116細(xì)胞24小時后，部分細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核固縮，局部空泡化，染色質(zhì)呈新月狀邊集等凋亡形態(tài)學(xué)特征。(4)熒光底物法測定CSL作用HCT-116細(xì)胞16h，糜蛋白酶活性明顯下降，并呈現(xiàn)濃度依賴性(P<0.05)。(5) Westem blot檢測顯示CSL作用HCT-116細(xì)胞24h后，P53、P27、Bax蛋白表達(dá)明顯增加，并呈現(xiàn)濃度依賴性(P<0.05)。

4、 結(jié)論：(1)CSL可以以時間、濃度依賴方式抑制結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞生長，并阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。(2) CSL的抗腫瘤作用的分子機(jī)制可能與抑制HCT-116細(xì)胞的蛋白酶體活性，進(jìn)而導(dǎo)致P53、P27、Bax蛋白表達(dá)增加有關(guān)。 第二部分、CSL對5-Fu抗HCT-116細(xì)胞的化療增敏效應(yīng) 目的：觀察CSL是否能夠增加HCT-116細(xì)胞對5-Fu的敏感性，并初步探討可能的作用機(jī)制。 方法：以MTT法觀察

5、CSL單藥及聯(lián)合5-Fu作用后對HCT-116細(xì)胞生存率的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率變化，Western blot檢測IкB蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：(1) MTT法顯示CSL與5-Fu聯(lián)合應(yīng)用較單用對HCT-116細(xì)胞生存率明顯下降(P<0.05)。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)CSL、5-Fu均可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥凋亡明顯增強(qiáng)(P<0.05)。(3) Western blot檢測表明CSL可以抑制5-Fu引起的核轉(zhuǎn)錄