肢體缺血后處理對(duì)腦缺血再灌注大鼠的GSK3β-MAP2a-b通路的影響機(jī)制.pdf

1、目的：通過(guò)觀察肢體缺血后處理中氯化鋰對(duì)糖原合酶激酶3β(GSK3β)及其下游微管相關(guān)蛋白2(MAP2a/b)的影響。探討肢體缺血后處理是否通過(guò)GSK3β/MAP2a/b信號(hào)通路對(duì)腦缺血再灌注起保護(hù)作用。
　　方法：制作腦缺血再灌注，肢體缺血后處理及氯化鋰干預(yù)大鼠模型，選用60只SPF級(jí)雄性SD大鼠(220-280g)按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組，假手術(shù)組（sham）、缺血再灌注組(I/R組)、肢體缺血后處理組(LpostC組)、肢體缺血

2、后處理+氯化鋰(GSK3β阻斷劑)組（LiCl組）。I/R組:缺血2h之后再灌注24h。LpostC組:缺血2h之后再灌注24h，再灌注的同時(shí)進(jìn)行肢體缺血后處理，雙側(cè)股動(dòng)脈缺血5min，灌注5min，3個(gè)循環(huán)。LiCl組:再灌注前20min進(jìn)行腹腔注射LiCl3mmol/kg，其他處置方法與LpostC組基本相同。于大鼠腦缺血再灌注24小時(shí)及加藥后進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，HE病理形態(tài)學(xué)染色，測(cè)定大鼠腦梗死體積;TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;

3、Western blotting法檢測(cè)P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b的蛋白表達(dá)。免疫組織化學(xué)法測(cè)P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b免疫陽(yáng)性細(xì)胞率。分析肢體缺血后處理是否通過(guò)GSK3β/MAP2a/b對(duì)腦缺血起保護(hù)作用。
　　結(jié)果：⑴神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分:假手術(shù)組大鼠無(wú)明顯神經(jīng)功能缺損，腦缺血再灌注模型組神經(jīng)功能缺損評(píng)分最高，肢體缺血后處理組較低，氯化鋰組神經(jīng)功能缺損評(píng)分最低，四組相比統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異(P＜0.05)。

4、⑵缺血側(cè)頂葉皮層（尾狀核平面）的病理改變:假手術(shù)組大鼠腦組織結(jié)構(gòu)正常。缺血再灌注組可見(jiàn)有大片壞死區(qū)，壞死區(qū)內(nèi)無(wú)神經(jīng)細(xì)胞及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。肢體缺血后處理組神經(jīng)細(xì)胞變性壞死程度較缺血再灌注組輕，而氯化鋰組較前兩者則壞死程度更輕。⑶大鼠腦梗死病灶體積:大鼠腦組織在假手術(shù)組中無(wú)梗死病灶。在缺血再灌注組中最大，在肢體缺血后處理中較缺血再灌注組減少，兩者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，梗死面積在氯化鋰組中最小，與缺血再灌注組和肢體缺血后處理組相比有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。⑷TUNEL實(shí)驗(yàn)中陽(yáng)性凋亡細(xì)胞率:假手術(shù)組有少量的凋亡細(xì)胞。I/R組凋亡細(xì)胞明顯增多，肢體缺血后處理組凋亡細(xì)胞減少，三組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。氯化鋰組與I/R組，肢體缺血后處理組相比凋亡細(xì)胞數(shù)減少，三組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑸Western blotting實(shí)驗(yàn)中缺血側(cè)項(xiàng)葉腦組織中P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b蛋白的表達(dá):假手術(shù)組可見(jiàn)有P-GSK3β(ser9)蛋白的表達(dá)，I/R組腦組織P

6、-GSK3β(ser9）蛋白的表達(dá)明顯減少，肢體缺血后處理組P-GSK3β(ser9)蛋白的表達(dá)增多，氯化鋰組P-GSK3β(ser9)蛋白的表達(dá)最多，四組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。假手術(shù)組有MAP2a/b表達(dá)最多，I/R組MAP2a/b表達(dá)減少，肢體缺血后處理組表達(dá)增多，氯化鋰組較肢體缺血后處理組表達(dá)增多，四組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。⑹免疫組化中P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的表達(dá):缺血

7、再灌注組僅有少量P-GSK3β(ser9)免疫陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，與假手術(shù)組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。與I/R組比較，LpostC組、LiCl組P-GSK3β(ser9)免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)逐漸增加，三組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。假手術(shù)組有MAP2a/b大量表達(dá)，為正常的神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)。缺血再灌注組僅有少量MAP2a/b免疫表達(dá)，與假手術(shù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與I/R組相比，LpostC組免疫陽(yáng)性細(xì)胞率增加，

8、LiCl組MAP2a/b免疫陽(yáng)性細(xì)胞率最多，三組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：①肢體缺血后處理組能改善神經(jīng)功能缺損癥狀，減少腦神經(jīng)病理組織損傷，減少腦梗死病灶體積，減少凋亡細(xì)胞，增加P-GSK3β(ser9)蛋白的表達(dá)，MAP2表達(dá)逐漸增多，逐漸增加P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b免疫陽(yáng)性細(xì)胞。肢體缺血后處理對(duì)腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用。②大鼠腦缺血再灌注減少P-GSK3β(ser9)，MAP2a/b