α-硫辛酸對電點(diǎn)燃致癇大鼠行為及海馬p38MAPK表達(dá)的影響.pdf

1、目的:癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)中一種常見的綜合征，可發(fā)生于各個年齡階段的人群，流行病學(xué)調(diào)查顯示:全世界大約有5000萬癲癇患者，我國的癲癇患病率為3.5‰-4.8‰。癲癇具有反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)，其病理生理基礎(chǔ)是腦部神經(jīng)元高度同步化異常放電導(dǎo)致正常的生理功能紊亂。短暫的反復(fù)發(fā)作或者一次持續(xù)發(fā)作均可導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)元凋亡，尤其是海馬等邊緣系統(tǒng)的神經(jīng)元凋亡更為明顯。研究表明，神經(jīng)元凋亡和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增多能夠促使海馬硬化，海馬硬化導(dǎo)致癲癇頻繁發(fā)作甚至形成難治性

2、癲癇。因此，深入研究癲癇發(fā)作后神經(jīng)元凋亡的分子機(jī)制，探索新型有效的抗神經(jīng)元凋亡的藥物具有深遠(yuǎn)的意義。
　　本實驗以杏仁核電點(diǎn)燃的慢性癲癇大鼠模型作為研究對象，以α-硫辛酸(α-lipoic acid，α-LA)作為干預(yù)劑。分別檢測大鼠點(diǎn)燃前后的后發(fā)放閾值(ADT)，達(dá)到每個發(fā)作等級所需的累積刺激數(shù)及累積后發(fā)放持續(xù)時間(ADD)，應(yīng)用Western Blot方法檢測p38MAPK及p-p38MAPK在海馬組織中的表達(dá)情況，應(yīng)用流式細(xì)

3、胞分析碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)染色技術(shù)檢測海馬神經(jīng)元凋亡率。從而研究α-LA對杏仁核電點(diǎn)燃癲癇大鼠的行為及海馬p38MAPK表達(dá)的影響，并初步探討α-LA對杏仁核電點(diǎn)燃致癇大鼠的腦保護(hù)作用及分子機(jī)制。
　　方法:選用雄性健康清潔的Wistar大鼠36只，體重在250-300g之間。隨機(jī)分為正常對照組:不予以任何處理;α-LA組:每天給予α-LA(40mg/kg)腹腔注射一次;假手術(shù)組:杏仁核植入電極后不予

4、以任何處理;電刺激模型組:植入電極后每天給予120％的點(diǎn)燃前ADT刺激一次;電刺激+α-LA低劑量組:植入電極后每天給予α-LA（20mg/kg）腹腔注射30min后以120％的點(diǎn)燃前ADT刺激一次;電刺激+α-LA高劑量組:植入電極后每天給予α-LA(40mg/kg)腹腔注射30min后以120％的點(diǎn)燃前ADT刺激一次，連續(xù)刺激15天，每組6只大鼠。依據(jù)Racine六級評價標(biāo)準(zhǔn)觀察大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)，記錄大鼠每天的發(fā)作等級及ADD。造模

5、結(jié)束后對大鼠采用斷頭取腦并快速分離海馬組織，用Western Blot方法檢測p38MAPK及p-p38MAPK的表達(dá)水平，并用流式細(xì)胞術(shù)PI染色技術(shù)檢測海馬神經(jīng)元凋亡率。
　　結(jié)果:
　　1.行為學(xué)觀察①達(dá)到第一次Ⅴ級發(fā)作所需的累積電刺激數(shù):與模型組（10.17±0.31）相比，電刺激+α-LA高劑量組（11.50±0.43）明顯增多（P＜0.05）;電刺激+α-LA低劑量組（11.17±0.31）與模型組和電刺激+α-L

6、A高劑量組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。②達(dá)到第一次Ⅴ級發(fā)作所需的累積ADD:與模型組（235.83±5.00）相比，電刺激+α-LA低劑量組（191.17±5.82）和電刺激+α-LA高劑量組（184.83±7.60）明顯縮短（P＜0.05）;電刺激+α-LA高劑量組與電刺激+α-LA低劑量組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。③點(diǎn)燃前后的ADT:模型組點(diǎn)燃后的ADT（133.33±12.29）較點(diǎn)燃前（273.33±24.

7、59）明顯降低（P＜0.05）;電刺激+α-LA高劑量組點(diǎn)燃后的ADT（200.00±17.13）較點(diǎn)燃前（286.67±22.31）明顯降低（P＜0.05）;電刺激+α-LA低劑量組點(diǎn)燃后ADT（153.33±19.78）較點(diǎn)燃前（280.00±30.55）明顯降低（P＜0.05）。④點(diǎn)燃后ADT:與模型組相比，電刺激+α-LA高劑量組明顯增高（P＜0.05）;電刺激+α-LA低劑量組與模型組和電刺激+α-LA高劑量組相比差異無統(tǒng)計學(xué)

8、意義(P＞0.05)。假手術(shù)組、正常對照組、α-LA組大鼠均無癲癇發(fā)作。
　　2.Western Blot檢測結(jié)果假手術(shù)組、正常對照組、α-LA組的海馬組織內(nèi)p-p38MAPK表達(dá)水平分別為0.55±0.06、0.62±0.05、0.64±0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與電刺激+α-LA低劑量組(2.20±0.04)和電刺激+α-LA高劑量組(1.26±0.93)相比，模型組海馬p-p38MAPK表達(dá)水平(3.39±

9、0.09)明顯增高（P＜0.05）;與電刺激+α-LA高劑量組相比，電刺激+α-LA低劑量組的海馬p-p38MAPK表達(dá)水平明顯增高（P＜0.05）;與假手術(shù)組、正常對照組、α-LA組相比，模型組、電刺激+α-LA低劑量組、電刺激+α-LA高劑量組的海馬p-p38MAPK表達(dá)水平明顯增高（P＜0.05）。
　　3.PI染色結(jié)果假手術(shù)組、正常對照組、α-LA組的海馬神經(jīng)元凋亡率分別為1.91±0.60、1.72±0.46、1.53±

10、0.37，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與電刺激+α-LA低劑量組(11.71±0.52)和電刺激+α-LA高劑量組(8.65±0.38)相比，模型組海馬神經(jīng)元凋亡率（14.83±0.60）明顯增高（P＜0.05）;與電刺激+α-LA高劑量組相比，電刺激+α-LA低劑量組的海馬神經(jīng)元凋亡率明顯增高（P＜0.05）;與假手術(shù)組、正常對照組和α-LA組相比，模型組、電刺激+α-LA低劑量組、電刺激+α-LA高劑量組的海馬神經(jīng)元凋亡率明顯