間充質(zhì)干細(xì)胞膜微粒在肺動(dòng)脈高壓治療中對(duì)RAS系統(tǒng)的作用研究.pdf

1、[目的]：
　　1.通過(guò)構(gòu)建肺動(dòng)脈高壓大鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，探討骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs)膜微粒(microparticles，MPs)對(duì)肺動(dòng)脈高壓的干預(yù)作用。
　　2.觀察骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞膜微粒在肺動(dòng)脈高壓大鼠肺及心臟等組織中的影響。
　　3.探討肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織局部及全身腎素血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin

2、system，RAS系統(tǒng))的改變，及骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞膜微粒對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠RAS系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用。
　　[方法]：
　　1.采用全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞至第三代，經(jīng)鑒定后采用無(wú)血清低營(yíng)養(yǎng)誘導(dǎo)培養(yǎng)過(guò)夜，誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞釋放并收集膜微粒。
　　2.健康的8周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組:空白對(duì)照組(Nor組)、肺動(dòng)脈高壓組(PAH組)、膜微粒干預(yù)組(MPs組)、膜微粒+A-779干預(yù)組(MPs+A-

3、779組)。采用一次性腹腔注射1％野百合堿50mg/Kg，以構(gòu)建肺動(dòng)脈高壓疾病模型;空白對(duì)照組(Nor組)通過(guò)一次性腹腔注射等量的生理鹽水。各實(shí)驗(yàn)大鼠在相同濕度、溫度、光照等環(huán)境及相同喂養(yǎng)條件下飼養(yǎng)21天后:空白對(duì)照組（Nor組）及肺動(dòng)脈高壓組（PAH組）在第21天始隔天尾靜脈注射0.5ml生理鹽水至第35天;膜微粒干預(yù)組（MPs組）在第21天始隔天尾靜脈注射0.5ml生理鹽水溶解配制的膜微粒30ug/只至第35天;膜微粒+A-779干

4、預(yù)組（MPs+A-779組）在第21天始隔天尾靜脈先注射0.5ml生理鹽水溶解配制的A-779120ug/只預(yù)處理，然后再注射0.5ml生理鹽水溶解配制的膜微粒30ug/只至第35天。第35天，經(jīng)右側(cè)頸靜脈置右心導(dǎo)管測(cè)量各實(shí)驗(yàn)組大鼠血流動(dòng)力學(xué)變化，留取血液標(biāo)本后處死并取大鼠肺、心臟等組織，測(cè)量右心室肥厚指數(shù)(RV/LV+S)、肺小動(dòng)脈管壁厚度指數(shù)(TI)及肺小動(dòng)脈管腔面積指數(shù)(AI);肺組織及右室病理切片行HE染色、Masson染色;E

5、LISA法測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組大鼠肺組織勻漿及血清Ang-(1-7)、Ang-Ⅱ的濃度;RT-PCR測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組大鼠肺組織ACE2、ACE mRNA表達(dá)水平。
　　[結(jié)果]：
　　1.SD大鼠生長(zhǎng)狀況:Nor組及MPs組均較PAH組及MPs+A-779組生長(zhǎng)發(fā)育良好，食欲良好，無(wú)消瘦，呼吸平穩(wěn)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均無(wú)死亡例數(shù);PAH組實(shí)驗(yàn)過(guò)程中死亡例數(shù)3例;MPs+A-779組實(shí)驗(yàn)過(guò)程中死亡例數(shù)2例。
　　2.血流動(dòng)力學(xué)改變:PAH組

6、平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)較Nor組顯著升高(P＜0.01);MPs組mPAP較PAH組明顯下降(P＜0.01)，而與Nor組相比稍升高，但兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);MPs+A-779組mPAP較PAH組下降(P＜0.01)，但與Nor組及MPs組相比均明顯升高（P＜0.01）。
　　3.右室肥厚指數(shù)(RV/LV+S)改變:PAH組RV/LV+S較Nor組顯著升高(P＜0.01); MPs組RV/LV+S較PAH組明顯

7、下降(P＜0.01)，而與Nor組相比，RV/LV+S有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);MPs+A-779組RV/LV+S較Nor組及MPs組明顯升高(P＜0.01)，而與PAH組相比，RV/LV+S有所下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.HE染色:肺組織HE染色:PAH組肺小動(dòng)脈厚度指數(shù)(TI)及面積指數(shù)(AI)均較Nor組顯著升高(P＜0.01); MPs組TI及AI均較PAH組明顯下降(P＜0.0

8、1)，但與Nor組相比，TI及AI均有所升高，但兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);MPs+A-779組與Nor組、MPs組相比，TI及AI均顯著升高(P＜0.01)，與PAH組相比，TI及AI均下降(P＜0.05)。肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況:PAH組及MPs+A-779組肺小動(dòng)脈周?chē)梢?jiàn)中、大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，而在Nor組及MPs組淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況有所緩解。右室HE染色:PAH組及MPs+A-779組右室心肌細(xì)胞肥大、排列紊亂，可見(jiàn)炎

9、癥細(xì)胞浸潤(rùn)，而Nor組及MPs組則有所緩解。
　　5.Masson三色染色:PAH組肺組織及右室膠原纖維容積分?jǐn)?shù)均較Nor組顯著升高(P＜0.01); MPs組肺組織及右室膠原纖維容積分?jǐn)?shù)均較PAH組明顯降低(P＜0.01)，與Nor組相比，肺組織膠原纖維容積分?jǐn)?shù)升高(P＜0.05)，同時(shí)右室膠原纖維容積分?jǐn)?shù)也升高(P＜0.01); MPs+A-779組肺組織及右室膠原纖維容積分?jǐn)?shù)均較Nor組及MPs組升高(P＜0.01)，同時(shí)較

10、PAH組下降（P＜0.01）。
　　6.ELISA檢測(cè):肺組織局部及血漿Ang-(1-7)ELISA檢測(cè):PAH組肺組織及血漿Ang-(1-7)蛋白表達(dá)較Nor組明顯下降(P＜0.01);MPs組肺組織及血漿與Nor組相比，Ang-(1-7)蛋白表達(dá)下降(P＜0.05)，但較PAH組明顯升高(P＜0.01);MPs+A-779組肺組織及血漿Ang-(1-7)蛋白表達(dá)較Nor組及MPs組均顯著下降(P＜0.01)，而較PAH組升高，

11、但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。肺組織局部及血漿Ang-Ⅱ ELISA檢測(cè):PAH組肺組織及血漿Ang-Ⅱ蛋白表達(dá)較Nor組明顯升高(P＜0.01);MPs組肺組織及血漿與Nor組相比，Ang-Ⅱ蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)，但較PAH組明顯減少(P＜0.01);MPs+A-779組肺組織及血漿Ang-Ⅱ蛋白表達(dá)較Nor組及MPs組均明顯升高(P＜0.01)，而較PAH組下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　7.RT

12、-PCR檢測(cè):PAH組肺組織ACE2 mRNA相對(duì)表達(dá)量較Nor組減少(P＜0.01);MPs組與Nor組相比，ACE2 mRNA相對(duì)表達(dá)量減少(P＜0.05)，但較PAH組明顯升高(P＜0.01);MPs+A-779組肺組織ACE2 mRNA相對(duì)表達(dá)量較Nor組及MPs組均減少(P＜0.01)，而較PAH組升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。PAH組肺組織ACE mRNA相對(duì)表達(dá)量較Nor組升高(P＜0.01);MPs組與Nor

13、組相比，ACE mRNA相對(duì)表達(dá)量升高(P＜0.01)，但較PAH組明顯減少(P＜0.01);MPs+A-779組肺組織ACE mRNA相對(duì)表達(dá)量較Nor組及MPs組均升高(P＜0.01)，而較PAH組降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　[結(jié)論]：
　　1.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜微?？山档头蝿?dòng)脈壓力，改善肺血管及心室重構(gòu)，為肺動(dòng)脈高壓治療提供一條新的可能的策略。
　　2.RAS系統(tǒng)的失衡在肺動(dòng)脈高壓肺組織炎癥、