六種小鼠腫瘤遺傳改變的AFLP分析及其差異片段的克隆.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文六種小鼠腫瘤遺傳改變的AFLP分析及其差異片段的克隆姓名：梁智勇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：史景泉魏泓2001.5.1顯示高、低轉(zhuǎn)移性肝癌Hca／16A3F與Hca／A2P基因組闊存在差異，4對(duì)雙酶切AFLP引物擴(kuò)增結(jié)果顯示二者間存在差異。應(yīng)用單酶切AFLP法檢測(cè)到8條差異片段，應(yīng)用雙酶切AFLP法共檢測(cè)到2l條差異片段。提示腫瘤在發(fā)生、發(fā)展過程中出現(xiàn)了基因組變異，這些變異可能是由于基因突

2、變、缺失、擴(kuò)增或重組等改變引起的。3對(duì)差異明顯、重復(fù)性好的29條片段進(jìn)行回收，再擴(kuò)增后與pUCmT載體連接，應(yīng)用JMl09大腸桿菌轉(zhuǎn)化克隆，經(jīng)篩選后測(cè)序。(1)建立了簡(jiǎn)便的銀染聚丙烯酰胺凝膠回收DNA片段方法半玻板凝膠染色法。(2)3條克隆片段進(jìn)行測(cè)序，經(jīng)BLAST搜尋未見同源性序列，提示可能是新的基因序列。4應(yīng)用AFLP技術(shù)對(duì)10個(gè)品系小鼠進(jìn)行分析。17條單酶切AFLP引物、20對(duì)雙酶切AFLP引物檢測(cè)到10個(gè)品系小鼠的多態(tài)性變化。單

3、酶切AFLP共擴(kuò)出251帶，片段大小在100bp一2000bp之間，共得到89個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，占總擴(kuò)增帶的355％。雙酶切AFLP在50bp一600bp之間擴(kuò)增出清晰條帶，統(tǒng)計(jì)1507條帶，共得到378個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，占總擴(kuò)增帶的251％。對(duì)多態(tài)性片段進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)算出不同品系間的相似指數(shù)(F)和遺傳距離指數(shù)(P)，根據(jù)NJ法構(gòu)建系統(tǒng)樹。結(jié)果表明昆明鼠(KM)與TA2、BALB／c、BALB／cnu關(guān)系較近：所有品系間關(guān)系最近的兩品系為BALB／