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文檔簡介
1、腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-Angiotensin System,RAS)是血管張力和容量平衡調(diào)節(jié)的關(guān)鍵系統(tǒng),與高血壓和充血性心力衰竭等心血管疾病有著密切關(guān)系。近年來血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)的研究擴(kuò)大了RAS系統(tǒng)在心血管系統(tǒng)以及其他系統(tǒng)中發(fā)揮的生物效應(yīng), ACE2不僅能將血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ)分解成血管緊張素片段[1-7],還能作用于激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)(Kallikrein-Kinin System,KK
2、S)的重要組分緩激肽。這些肽類都是通過相應(yīng)的G蛋白偶聯(lián)受體(G protein-coupled receptors,GPCRs)發(fā)揮其生物學(xué)功能。最新研究發(fā)現(xiàn) GPCRs能以同源或異源二聚體,甚至是高階寡聚體的形式存在,這些形式有不同于單體的特定功能特征。本文探討人的血管緊張素Ⅱ1型受體(AngiotensinⅡ1 receptor,AT1R)和緩激肽1型受體(bradykinin receptor1,B1R)以及緩激肽2型受體(bra
3、dykinin receptor2,B2R)之間的相互作用。這些結(jié)果將為G蛋白偶聯(lián)受體高階聚化尤其是AT1R/B1R/B2R的異源三聚化的分子組成提供新的見解,并為探尋相關(guān)疾病發(fā)生的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。
目前用于研究高階寡聚化的方法主要是多種技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用,如順序性共振能量轉(zhuǎn)移(Sequential resonance energy transfer,SRET)技術(shù)、雙分子發(fā)光互補(bǔ)(Bimolecular luminesce
4、nce complementation,BiLC)聯(lián)合生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)技術(shù)、雙分子熒光互補(bǔ)(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)聯(lián)合生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)技術(shù)以及雙分子熒光互補(bǔ)(Bimolecular luminescence complementation,BiLC)聯(lián)合熒光共振能量轉(zhuǎn)移(Fluorescenceresonance energy tran
5、sfer,F(xiàn)RET)技術(shù)等。本課題,我們首先成功構(gòu)建六個真核重組質(zhì)粒:NRlu-pcDNA3.1、CRlu-pcDNA3.1、Rluc-AT1R-pcDNA3.1、NRlu-AT1R-pcDNA3.1、CRlu-AT2R-pcDNA3.1和C Rlu-B2R-pcDNA3.1;然后利用BRET和BiLC技術(shù)研究AT1R與B1R、AT1R和B2R的異源二聚化;最后利用SRET和BiLC+BRE T技術(shù)研究AT1 R/B1 R/B2 R的異
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