Ang Ⅱ通過AT1R降低大鼠心肌細胞中AngptI2的表達.pdf

1、心力衰竭是多種疾病的終末階段，死亡率極高。隨著人口老齡化進程的發(fā)展和社會壓力的增加，心力衰竭的發(fā)病率逐年上升并呈現(xiàn)出發(fā)病年齡年輕化的趨勢，給社會及家庭帶來嚴重的經(jīng)濟和精神負擔(dān)。而心肌肥厚作為心力衰竭發(fā)生、發(fā)展的基礎(chǔ)，已經(jīng)成為探究心力衰竭發(fā)病機制及尋找新的治療手段的研究重點。因此，探究心肌肥厚相關(guān)發(fā)病機制，尋找新的治療靶點是降低心力衰竭發(fā)病率和死亡率的關(guān)鍵。
　　目的:
　　本實驗旨在探究血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ

2、，AngⅡ)對大鼠心肌細胞中血管生成素樣蛋白2(Angiopoietin-like protein2，AngptI2)水平的影響。在此基礎(chǔ)上，進一步探究AngⅡ影響AngptI2變化的可能機制。
　　方法:
　　1.選用正常Wistar大乳鼠（3天以內(nèi)）30只;
　　2.分離純化大乳鼠心肌細胞，接種至培養(yǎng)板，待細胞穩(wěn)定貼壁后，將細胞分為正常對照組，100nmol/L AngⅡ刺激組(0h、6h、24h、48h)，24h

3、 AngⅡ刺激組(0nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L),AngⅡ(100nmol/L,24h)+ losartan(10-4mol/L), normal+losartan(10-4mol/L), AngⅡ(100nmol/L,24h)+PD123319(10-4mol/L), normal+PD123319(10-4mol/L)。
　　3.收集各組細胞培養(yǎng)基;提取各組蛋白、RNA;固定24孔板

4、各處理組細胞。
　　4.應(yīng)用細胞免疫熒光法鑒定心肌細胞;應(yīng)用ELISA法檢測各組培養(yǎng)中AngptI2的表達水平;應(yīng)用細胞免疫熒光法、Western Blot技術(shù)、RT-PCR法分別在細胞、蛋白和基因水平檢測各組AngptI2的表達量。
　　結(jié)果:
　　1.心肌細胞的鑒定:細胞貼壁第二天，顯微鏡下心肌細胞呈不規(guī)則形狀、聚集成簇生長，并以一定的節(jié)律跳動，同時，視野中可見長梭形細胞，為心臟成纖維細胞;倒置熒光顯微鏡下觀察細胞

5、免疫熒光結(jié)果，心肌細胞胞漿中高表達肌動蛋白α(α-SMA)，而心臟成纖維細胞基本不表達α-SMA。心肌細胞純度約為94％。
　　2.AngⅡ?qū)ngptl2表達量的影響:通過對AngⅡ在不同濃度、不同時間條件下對AngptI2的表達量的作用的研究，確定100nmol/L AngⅡ刺激24小時時，AngptI2的表達量較對照組下降最明顯(P＜0.05)。
　　3.AT1R和AT2R拮抗劑的作用:在100nmol/L AngⅡ刺

6、激24h條件下，AngⅡ+losartan組中AngptI2的表達量較AngⅡ組明顯增加(P＜0.05)，而normal+losartan組和normal+PD123319組中Angptl2的表達量與正常對照組相比無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05); AngⅡ+ PD123319組中AngptI2的表達量較AngⅡ組無明顯變化(P＞0.05)。
　　結(jié)論及意義:
　　1.AngⅡ在較低濃度時可以下調(diào)心肌細胞中AngptI2的表