血管緊張素Ⅱ?qū)π律笫笮募〖?xì)胞內(nèi)脂素表達(dá)的影響.pdf

1、目的:傳統(tǒng)觀念認(rèn)為脂肪組織是一種儲(chǔ)存能量的器官。近年來,脂肪組織作為一個(gè)內(nèi)分泌器官己成為學(xué)術(shù)界的共識(shí),分泌眾多脂肪細(xì)胞因子,包括腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、血纖維蛋白溶酶原激活抑制劑(PAI-1)、瘦素(leptin)、脂聯(lián)素(adiponectin)、抵抗素(resistin)、內(nèi)脂素(visfatin)等。脂肪細(xì)胞因子在維持正常機(jī)體的能量代謝、炎癥反應(yīng)、血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞功能

2、、應(yīng)激等多方面具有重要影響。肥胖時(shí)隨著脂肪的堆積以及脂肪細(xì)胞體積的增大,脂肪細(xì)胞因子分泌失調(diào),最終導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病、代謝綜合征等一系列肥胖相關(guān)性疾病。
　　 Fukuhara等[1]利用差異顯示的方法對人體皮下脂肪和內(nèi)臟脂肪PCR的產(chǎn)物進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)了一個(gè)在內(nèi)臟脂肪特異性高表達(dá)的mRNA。測序結(jié)果表明該cDNA片段與前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子(Pre-B-coloning enhancefactor,PBEF)基因的5

3、'端非編碼區(qū)序列完全相同,因此內(nèi)脂素又被稱為PBEF。內(nèi)脂素作為一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子,其主要來源于內(nèi)臟脂肪組織,具有擬胰島素活性,可降低血糖。循環(huán)中的內(nèi)脂素不僅僅與血漿中炎性標(biāo)記物的水平相關(guān)[2],還具有其他多種生物學(xué)功能,可能與血管損傷、內(nèi)皮功能紊亂相關(guān)[3-4]。內(nèi)脂素可能直接促進(jìn)血管炎癥,在慢性炎癥的背景下,成為聯(lián)系代謝紊亂與包括動(dòng)脈粥樣硬化和冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性疾病等動(dòng)脈粥樣硬化血栓形成疾病的橋梁。
　　 內(nèi)脂素主要在

4、內(nèi)臟脂肪細(xì)胞產(chǎn)生。同時(shí),在骨骼肌、肝臟、骨髓基質(zhì)細(xì)胞、淋巴細(xì)胞中均有表達(dá)[5]。而心肌細(xì)胞是否表達(dá)內(nèi)脂素,血管緊張素Ⅱ刺激對心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達(dá)起了什么作用尚無相關(guān)報(bào)道。本研究通過觀察不同濃度的血管緊張素Ⅱ、不同作用時(shí)間對體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達(dá)的影響,探討血管緊張素Ⅱ刺激下心肌細(xì)胞內(nèi)脂素的表達(dá),為了心血管疾病的發(fā)病機(jī)制增加了新內(nèi)容、新思路,為臨床防治提供一個(gè)新的靶點(diǎn)。
　　 方法:無菌試驗(yàn)條件下不分性別的提取新生2-

5、3天的Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),48小時(shí)含血清培養(yǎng),24小時(shí)撤血清培養(yǎng)之后,選取生長狀態(tài)好的細(xì)胞隨機(jī)分為10組。不同濃度血管緊張素Ⅱ五組:①血管緊張素Ⅱ10-8mol/L組、②血管緊張素Ⅱ10-7mol/L組、③血管緊張素Ⅱ10-6mol/L組、④血管緊張素Ⅱ10-5mol/L組、⑤對照組。不同作用時(shí)間五組①6h組、②12h組、③24h組、④48h組、⑤對照組。以不同濃度的血管緊張素Ⅱ干預(yù)48小時(shí)及血

6、管緊張素Ⅱ(10-6mol/L)作用不同時(shí)間后,以GAPDH為內(nèi)對照,應(yīng)用RT-PCR和western-blot技術(shù)檢測心肌細(xì)胞中內(nèi)脂素mRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.體外成功培養(yǎng)SD大鼠心肌細(xì)胞。
　　 2.隨血管緊張素Ⅱ濃度增加,心肌細(xì)胞活力增加,并且在濃度為10-6mol/L時(shí)達(dá)到最大,隨血管緊張素Ⅱ濃度進(jìn)一步增加,心肌細(xì)胞活力下降。
　　 3.隨血管緊張素Ⅱ濃度增加,大鼠心肌細(xì)

7、胞Visfatin-mRNA及蛋白的表達(dá)明顯增加。
　　 4.血管緊張素Ⅱ刺激下的心肌細(xì)胞活力呈時(shí)間依賴性,12小時(shí)達(dá)高峰,24小時(shí)后心肌細(xì)胞活力下降。
　　 5.心肌細(xì)胞在血管緊張素Ⅱ作用24h內(nèi),內(nèi)脂素mRNA及蛋白的表達(dá)隨作用時(shí)間的延長而明顯增加;作用48h,內(nèi)脂素mRNA及蛋白的表達(dá)相對于作用24h時(shí)下降。
　　 結(jié)論:心肌細(xì)胞可以表達(dá)內(nèi)脂素。血管緊張素Ⅱ可促進(jìn)體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞內(nèi)脂素的表達(dá)水平的增加。隨