AgNO-,3-在梨離體葉片不定梢誘導(dǎo)培養(yǎng)中效應(yīng)的研究.pdf

1、本研究以四川主栽梨品種‘金水’(PyruspyrifoliaNakai.cv.Jinshui)和‘金花’(PyrusbrestchneideriRehd.cv.Jinhua)為材料，建立起無菌繁殖體系，并從中取得葉片進(jìn)行離體培養(yǎng)，通過均勻設(shè)計法選擇不同培養(yǎng)基和添加不同外源激素，篩選出梨葉片不定梢再生的最適條件。在選出的最佳培養(yǎng)基上添加不同濃度的AgNO3，觀察葉片愈傷組織的誘導(dǎo)、分化過程中外觀形態(tài)變化，分析不同AgNO3濃度處理后葉片內(nèi)

2、抗氧化物酶、自由基、可溶性蛋白質(zhì)以及內(nèi)源多胺的變化規(guī)律。通過AgNO3對梨葉片不定梢誘導(dǎo)過程中細(xì)胞分化、器官發(fā)生以及生理生化變化的影響分析，得到如下結(jié)果： (1)利用均勻設(shè)計方法篩選‘金水’和‘金花’葉片不定梢誘導(dǎo)最適培養(yǎng)條件，以不定梢再生率、平均每葉梢數(shù)以及不定梢再生力三個指標(biāo)作為考察依據(jù)，發(fā)現(xiàn)： ‘金花’最適培養(yǎng)條件為NN69+BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L，不定梢誘導(dǎo)率達(dá)到40.49％。 ‘金水’

3、最適培養(yǎng)條件為NN69+TDZ1.0mg/L+NAA0.6mg/L，不定梢誘導(dǎo)率達(dá)到58.07％。 (2)通過對葉片不定梢發(fā)生過程的外觀形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)：不定梢發(fā)生經(jīng)歷了四個階段。第一階段，葉邊緣逐漸隆起腫脹，葉脈膨大并在切傷處、葉柄端處產(chǎn)生少量白色愈傷組織。第二階段，愈傷組織大量發(fā)生且少部分愈傷組織上出現(xiàn)肉眼可觀察到的淡黃色芽點。第三階段為不定芽產(chǎn)生的高峰期。第四階段，產(chǎn)生不定芽的葉片數(shù)逐漸減少，大部分葉片進(jìn)入不定芽伸長期。

4、 (3)0.1mg/LAgNO3能明顯提高‘金水’葉片不定梢再生率和再生數(shù)，而對‘金花’葉片不定梢再生有效促進(jìn)的AgNO3濃度范圍為0.1～0.5mg/L。 (4)通過對葉片誘導(dǎo)過程中不同AgNO3濃度與抗氧化物酶及自由基的關(guān)系研究表明：在暗培養(yǎng)期間，葉片中CAT和POD活性均有較大幅度變化，特別是經(jīng)0.1mg/LAgNO3處理后，‘金花’葉片中POD活性及‘金水’葉片中CAT活性增幅均高于其余三個處理。與此同時，葉片中O2-

5、產(chǎn)生速率和H2O2含量也會增加但上升幅度不及對照。進(jìn)入光培養(yǎng)階段后，添加適當(dāng)濃度的AgNO3可提高葉片原有的SOD峰值，且H2O2含量和O2-產(chǎn)生速率隨之下降，但較高濃度AgNO3處理易引起H2O2含量和O2-產(chǎn)生速率回升。雖然品種間抗氧化物酶活性變化不完全一致，但通過比較發(fā)現(xiàn)0.1mg/LAgNO3對提高‘金花’和‘金水’葉片抗氧化物酶活性效果最佳。 (5)不同濃度AgNO3處理后葉片內(nèi)可溶性蛋白含量隨葉片不定梢的發(fā)生而不斷升

6、高。暗培養(yǎng)期間，各處理間無顯著差異，進(jìn)入不定梢發(fā)生期后，附加0.1mg/LAgNO3的‘金水’和‘金花’葉片中可溶性蛋白含量一直與對照呈顯著差異，且在35d時葉片可溶性蛋白含量達(dá)到峰值。 (6)對不定梢誘導(dǎo)過程中內(nèi)源多胺含量研究表明：多胺含量會隨著細(xì)胞分裂分化迅速增加，其中腐胺含量在培養(yǎng)5d時形成高峰，精胺在20d時出現(xiàn)峰值，而亞精胺在培養(yǎng)過程中兩次出現(xiàn)峰值，由此推斷腐胺、精胺和亞精胺對梨葉片愈傷組織細(xì)胞分裂和分化起著各自獨立又