Vams及其主要成分Vam3抗慢性氣道炎癥作用及機制研究.pdf

1、本實驗室自1985年起，即開展了以白三烯(LTs)為靶點的抗炎抗哮喘藥物的研發(fā)工作。先后篩選了數(shù)百個化合物和中草藥成分，發(fā)現(xiàn)從山葡萄根中得到的有效部位—Vams具有對抗LTD4引起的支氣管平滑肌擴張和過敏作用。Vams屬天然二苯乙烯低聚體類化合物，結(jié)構(gòu)完全不同于國外新上市的白三烯受體拮抗劑。Vams的主要成分為Vam3、Vam4和Vam21，其中Vam3為白藜蘆醇二聚體，可通過化學(xué)合成，為Vams中主要的抗炎活性成分。本論文工作從抗哮喘

2、、抗過敏以及免疫調(diào)節(jié)等幾方面考察了Vams的藥理活性，同時系統(tǒng)地考察了Vam3抗哮喘和抗COPD的活性及機制。研究結(jié)果包括以下幾部分： 1.Vams藥理活性初步研究1.1Vams抗哮喘作用1.1.1Vams抗卵白蛋白(ovalbumin，OVA)致豚鼠哮喘Vams200、120和80mg/kg口服給藥，連續(xù)5天，延長了OVA致豚鼠哮喘的抽搐潛伏期，延長率分別為45.3％、47.2％和36.2％；給藥組抽搐和死亡動物的發(fā)生率為0％

3、、37.5％和50.0％，降低率分別為100％、52.3％和36.4％。 1.1.2Vams抗組胺致豚鼠哮喘Vams100和50mg/kg口服給藥，連續(xù)5天，對組胺致豚鼠哮喘的抽搐潛伏期延長率為484.4％和237.0％，抽搐和死亡動物發(fā)生率均為0％，降低率均為100％。 1.1.3Vams抗組胺及乙酰膽堿合用致豚鼠哮喘Vams50和35mg/kg口服給藥，連續(xù)5天，可緩解0.1％組胺和2％氯化乙酰膽堿等體積混合液霧化所

4、致的豚鼠哮喘。抽搐潛伏期延長率分別為148％和42.9％，動物抽搐發(fā)生率分別為16.7％和66.7％，動物死亡發(fā)生率分別為0％和16.7％。 1.1.4Vams抗卵白蛋白引起的小鼠哮喘病理檢查結(jié)果可見，模型組小鼠小支氣管和小血管周圍有大量炎性細胞浸潤，支氣管上皮細胞可見杯狀細胞增生，粘性分泌物明顯增加，肺泡腔或支氣管內(nèi)可見少量炎性細胞； 1.2抗過敏作用1.2.1Vams抑制大鼠被動皮膚過敏反應(yīng)Vams50mg/kg，皮

5、下給藥，對大鼠被動皮膚過敏反應(yīng)的抑制率為48.1％。 1.2.2Vams對2,4-二硝基氟苯誘發(fā)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)的抑制作用Vams50和100mg/kg皮下給藥連續(xù)5天，對2,4-二硝基氟苯誘發(fā)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)有抑制作用。對耳腫脹的抑制率為40.0％和75.8％，對胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)影響不顯著。 1.3Vams免疫調(diào)節(jié)作用Vams100mg/kg皮下給藥，連續(xù)7天，對小鼠剛果紅吞噬反應(yīng)有促進作用，吞噬增加率為10.8％。

6、 2.Vams抗哮喘及抗過敏作用機理初探2.1Vam3、Vam4和Vam21對豚鼠氣管LTD4受體的拮抗作用Vam3、Vam4和Vam21可抑制LTD4誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管收縮，IC50分別為1×10-7mol/L、5×10-7mol/L和4×10-5mol/L。 2.2Vam3和Vam4對大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒的抑制作用Vam3和Vam4可抑制大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒，1×10-6mol/L和1×10-5mol/LVam3

7、對大鼠腹腔肥大細胞脫顆粒的抑制率分別為26.6％和43.1％。 2.3Vam3、Vam4和Vam21對小鼠腹腔巨噬細胞生成NO的抑制作用Vam3、Vam4和Vam21可抑制小鼠腹腔巨噬細胞生成NO，IC50分別為7.3×10-7mol/L、4.5×10-7mol/L和2.2×10-7mol/L。 2.4Vam3、Vam4和Vam21對大鼠多形核白細胞5-LO活性的影響Vam3、Vam4和Vam21在10-5mol/L濃度

8、下均可顯著抑制LTB4生成，抑制率分別為83％、76％和56％， 2.5Vam3、Vam4和Vam21對PMA誘導(dǎo)的大鼠腹腔PMNs呼吸爆發(fā)的影響Vam3、Vam4和Vam21在1×10-7-1×10-5mol/L濃度范圍內(nèi)可顯著抑制PMA誘導(dǎo)的大鼠腹腔PMNs呼吸爆發(fā)中超氧陰離子的產(chǎn)生，且呈劑量依賴關(guān)系。 3.Vam3抗慢性氣道炎癥活性研究3.1Vam3對卵白蛋白誘導(dǎo)的小鼠哮喘模型的緩解作用病理檢查結(jié)果可見，Vam3給

9、藥組肺組織炎性細胞浸潤明顯減輕，支氣管內(nèi)分泌物較模型組減少，上皮細胞脫落減輕。 3.2Vam3對被動吸煙導(dǎo)致的小鼠COPD模型的緩解作用病理檢查結(jié)果可見，Vam3大劑量組肺泡腔炎性細胞浸潤減少，小支氣管粘膜上皮細胞未見明顯病變，肺組織未見纖維組織增生。 4.Vam3抗慢性氣道炎癥機制研究4.1Vam3抑制LPS誘導(dǎo)的HL-60細胞NF-κB活化Vam3在10-7mol/L和10-5mol/L濃度下可顯著抑制LPS(1μg

10、/mL)誘導(dǎo)的HL-60細胞NF-κB活化，抑制率分別為34.2％和64.5％。 4.2Vam3抑制哮喘小鼠肺組織細胞I-κB降解和NF-κB核轉(zhuǎn)位Vam3在49、70和100mg/kg劑量下，灌胃給藥，連續(xù)7天，可顯著抑制卵白蛋白致喘小鼠肺組織細胞IκB降解和NF-κB核轉(zhuǎn)位。 4.3Vam3抑制哮喘小鼠肺組織細胞NF-κB表達免疫組化實驗結(jié)果可見，Vam3在49、70和100mg/kg劑量下，灌胃給藥，連續(xù)7天，可顯

11、著降低NF-κB在氣管上皮細胞，肺泡壁成纖維細胞以及浸潤的白細胞中的活化，毛細血管內(nèi)皮細胞未觀察到顯著的NF-κB表達。 4.4Vam3抑制哮喘小鼠肺組織細胞PKC活化Vam3在49、70和100mg/kg劑量下，灌胃給藥，連續(xù)7天，可顯著降低小鼠肺組織PKC活化，抑制率分別為17.9％、34.8％和51.9％。 4.5Vam3抑制哮喘小鼠外周血單核細胞(PBMC)分泌細胞因子Vam3在49、70和100mg/kg劑量下

12、，灌胃給藥，連續(xù)7天，可顯著降低哮喘小鼠PBMC中IFN-r和IL-4水平，IL-4降低較IFN-r降低顯著，IFN-r/IL-4比值升高。 綜上所述，可以得出以下結(jié)論：1)Vams通過多靶點發(fā)揮抗過敏性哮喘功效，其最主要的作用靶點可能為白三烯。2)Vam3是Vams中最主要的活性成分，具有明確的抗慢性氣道炎癥(支氣管哮喘和COPD)的作用。3)Vam3可抑制NF-κB的表達、抑制NF-κBP65亞單位的核轉(zhuǎn)位，進而抑制NF-κ

13、B的活化。4)Vam3通過抑制NF-κB活化，下調(diào)趨化因子RANTES和IL-8等的表達，降低各種炎性細胞的浸潤。5)炎性細胞浸潤減少，使得多種炎性細胞因子的分泌降低，炎癥因子分泌降低，也減少了炎性細胞的浸潤和存活，最終表現(xiàn)出緩解慢性氣道炎癥的作用。6)Vam3可顯著抑制哮喘小鼠PKC活性，減少其底物磷酸化，這可能是Vam3抑制NF-κB活化的原因之一。7)Vam3可改善哮喘Th1型淋巴細胞和Th2型淋巴細胞的失衡，這可能是其治療哮喘的