長鏈非編碼RNA TUC40-在胚胎心臟發(fā)育中作用的初步研究.pdf

1、目的:探索Pbx1/TUC40-在胚胎心臟發(fā)育中的作用。
　　方法:前期應(yīng)用長鏈非編碼RNA微陣列芯片篩查發(fā)現(xiàn)，在室間隔缺損人工流產(chǎn)的胚胎心臟組織中，超保守片段uc.40-異常高表達(dá)。采用鏈特異性逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)確認(rèn)uc.40-的轉(zhuǎn)錄本transcribed uc.40-(TUC40-)。應(yīng)用生物信息學(xué)方法分析uc.40-，TUC40-及Pbx1的基本信息。進(jìn)一步應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)，分析Pbx1/TUC40-

2、在小鼠胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)譜;在P19細(xì)胞水平，采用質(zhì)粒過表達(dá)uc.40-，通過檢測(cè)心肌細(xì)胞標(biāo)志物來判斷過表達(dá)對(duì)分化的影響，應(yīng)用流式細(xì)胞法（細(xì)胞周期）以及CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖，應(yīng)用流式細(xì)胞法（細(xì)胞凋亡）以及caspase-3法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)Pbx1在細(xì)胞誘導(dǎo)過程中的變化趨勢(shì)。
　　結(jié)果:我們應(yīng)用鏈特異性逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)確認(rèn)了uc.40-的轉(zhuǎn)錄本——TUC40-。生物信息學(xué)分析顯示TUC40-

3、為反義長鏈非編碼RNA，其正義基因Pbx1已被證實(shí)在室間隔胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用。在小鼠胚胎發(fā)育過程中，Pbx1/TUC40-的表達(dá)具有時(shí)空特異性，在胚胎心臟發(fā)育中，它們的表達(dá)有反向趨勢(shì)。在細(xì)胞模型中，uc.40-的過表達(dá)導(dǎo)致P19細(xì)胞分化障礙，阻礙P19細(xì)胞的增殖，使其易于發(fā)生凋亡，且導(dǎo)致Pbx1在誘導(dǎo)分化中喪失了上升趨勢(shì)。
　　結(jié)論: uc.40-的過表達(dá)可能是導(dǎo)致胚胎心臟發(fā)育畸形的原因之一。uc.40-是否通過Pbx1發(fā)揮作