磺脲類藥物和替米沙坦對(duì)MIN6細(xì)胞的影響.pdf

1、磺脲類藥物屬于胰島素促泌劑，它們?cè)谂R床上廣泛用于治療2 型糖尿病。但是，隨著治療時(shí)間延長(zhǎng)，臨床上出現(xiàn)藥物繼發(fā)性失效現(xiàn)象。有研究顯示，某些胰島素促泌劑（如格列本脲）可誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激，產(chǎn)生ROS，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。但是，目前尚不明了這些促泌劑通過(guò)何種機(jī)制損害β細(xì)胞，也不清楚是否所有的胰島素促泌劑都有類似的作用。而ARB 有保護(hù)β細(xì)胞功能的作用。 本研究選擇甲苯磺丁脲、格列吡嗪、格列奇特藥物和替米沙坦分別從細(xì)胞活力、細(xì)胞內(nèi)

2、ROS 生成和細(xì)胞凋亡三個(gè)方面探討胰島素促泌劑對(duì)β細(xì)胞的影響及其機(jī)制。 一．甲苯磺丁脲、格列吡嗪、格列奇特對(duì)MIN6 細(xì)胞的影響 目的：研究不同磺脲類藥物對(duì)胰島分泌細(xì)胞的影響及機(jī)制。 方法：不同濃度甲苯磺丁脲、格列吡嗪和格列奇特干預(yù)MIN6 細(xì)胞一定時(shí)間后，MTT 法檢測(cè)細(xì)胞活力變化，運(yùn)用ROS 捕獲劑雙氫溴乙啶（HE）、雙氫-乙酰乙酸二氯熒光黃（DCFH-DA）和雙氫羅丹明123（DHR123）孵育細(xì)胞，同過(guò)熒

3、光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)熒光、流式細(xì)胞儀檢測(cè)MIN6 細(xì)胞的MFI 而測(cè)得細(xì)胞內(nèi)ROS 水平。用Annexin-vFITC和PI 雙標(biāo)記細(xì)胞凋亡檢測(cè)法通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果：甲苯磺丁脲和格列吡嗪干預(yù)MIN6 細(xì)胞后，細(xì)胞活力明顯被抑制（P<0.05）；細(xì)胞內(nèi)的MFI 明顯增加；細(xì)胞凋亡率明顯增加；而且，細(xì)胞活力下降、MFI和細(xì)胞凋亡率與藥物作用濃度和時(shí)間呈正相關(guān)。而格列奇特干預(yù)MIN6 細(xì)胞后，細(xì)胞活力無(wú)明顯被

4、抑制（P>0.05）；細(xì)胞內(nèi)的MFI 無(wú)明顯增加；細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯增加。 結(jié)論：甲苯磺丁脲和格列吡嗪可誘導(dǎo)MIN6 細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激，誘導(dǎo)MIN6 細(xì)胞凋亡，它們對(duì)細(xì)胞損傷作用可能與氧自由基生成過(guò)多、ROS 蓄積有關(guān)。格列奇特不能誘導(dǎo)MIN6 細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激，不能誘導(dǎo)MIN6 細(xì)胞凋亡，這可能與它具有抗氧化劑作用有關(guān)。說(shuō)明并非所有磺脲類藥物對(duì)β細(xì)胞有損害作用。 二．替米沙坦對(duì)MIN6 細(xì)胞的影響 目的：研究血管

5、經(jīng)張素II 受體1 拮抗劑（ARB）藥物對(duì)胰島分泌細(xì)胞的影響及機(jī)制。 方法：不同濃度替米沙坦及替米沙坦和甲苯磺丁脲共同干預(yù)MIN6 細(xì)胞一定時(shí)間后，MTT 法檢測(cè)細(xì)胞活力變化，運(yùn)用ROS 捕獲劑雙氫溴乙啶（HE）、雙氫-乙酰乙酸二氯熒光黃（DCFH-DA）和雙氫羅丹明123（DHR123）孵育細(xì)胞，同過(guò)熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)熒光、流式細(xì)胞儀檢測(cè)MIN6 細(xì)胞的MFI 而測(cè)得細(xì)胞內(nèi)ROS 水平。用Annexin-vFITC和PI 雙

6、標(biāo)記細(xì)胞凋亡檢測(cè)法通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡情況。 結(jié)果：替米沙坦單獨(dú)干預(yù)MIN6 細(xì)胞后，細(xì)胞活力無(wú)明顯被抑制；細(xì)胞內(nèi)的MFI 無(wú)明顯增加；細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯增加；而替米沙坦和甲苯磺丁脲共同孵育MIN6 細(xì)胞后，細(xì)胞活力相對(duì)甲苯磺丁脲單獨(dú)干預(yù)MIN6 增強(qiáng)（P>0.05）；細(xì)胞內(nèi)的MFI 明顯減少；細(xì)胞凋亡率明顯減少。 結(jié)論：替米沙坦對(duì)MIN6 細(xì)胞氧化應(yīng)激有保護(hù)作用，不誘導(dǎo)MIN6細(xì)胞凋亡，ARB 能保護(hù)胰島β