對番茄灰霉具有拮抗作用的高貴鏈霉菌的分離及功能研究.pdf

1、番茄灰霉病是由半知菌亞門灰葡萄孢屬（Botrytis cinerea）真菌侵染所引起的，是番茄生產(chǎn)上的重要病害之一。由于該病菌很容易產(chǎn)生抗藥性，化學(xué)農(nóng)藥很難防治且容易造成環(huán)境的污染，故篩選尋找出安全有效的生物防治菌菌株來防治番茄灰霉病有重要的意義。
　　從滄州采集土樣，采用稀釋涂布法分離放線菌，并通過平板對峙法從土壤中分離篩選到的一株對番茄灰霉?。˙. cinerea）具有較強(qiáng)抑制作用的生防放線菌C51。最后，通過生物信息學(xué)工具B

2、LAST以及形態(tài)特征、生理生化分析，確定C51為高貴鏈霉菌（Streptomyces nobilis）。
　　通過對該菌株進(jìn)行觀察培養(yǎng)其形態(tài)特征、了解其生理生化性質(zhì)、16S rDNA編碼序列及其進(jìn)化發(fā)育樹的分析最終確定。
　　首先對菌株C51平板上的培養(yǎng)條件進(jìn)行研究，確定其培養(yǎng)條件為：在初始pH值為7.0改良的YEME培養(yǎng)基上28 oC下培養(yǎng)。并對菌落周圍瓊脂培養(yǎng)基漿液的抑菌活性進(jìn)行測定，確定抑菌活性物質(zhì)的的產(chǎn)生是獨(dú)立的，與

3、病菌的存在與否無關(guān)，可以直接進(jìn)行液體發(fā)酵進(jìn)行研究。
　　本研究采用抑制菌絲生長速率法對菌株C51發(fā)酵上清液的活性進(jìn)行測定，并顯微觀察發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵液中的活性物質(zhì)可使灰霉菌菌絲體畸形，出現(xiàn)囊腫、膨大結(jié)構(gòu)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，該菌株的發(fā)酵濾液對溫度（28-121 oC）和酸堿性（pH2-12）都有很好的耐受性，經(jīng)121 oC處理20 min后依然有76.4±0.4％的抑菌活性被保留。經(jīng)不同pH處理后其抑菌活性變化并不顯著。之后，進(jìn)行的盆栽試驗

4、結(jié)果表明，菌株C51的發(fā)酵上清液對番茄灰霉病有較好的防治效果，經(jīng)發(fā)酵液原液處理的防病效果為72.63±0.33%，與對照藥劑嘧菌酯1000倍稀釋液（72.51±0.80%）的防治效果相當(dāng)。因此，它有可能成為一種有效的生防制劑。
　　在搖瓶中對C51的發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進(jìn)行了篩選。通過單因素試驗和正交設(shè)計試驗，確定其最優(yōu)培養(yǎng)基為：葡萄糖1.5%、牛肉膏3.0%、NaCl0.04%、KH2PO40.04%、CaCO30.1%。最佳發(fā)