抗CD20單克隆抗體及IL-10基因聯(lián)合免疫治療對胰島β細(xì)胞保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的觀察抗CD20單克隆抗體(Anti-CD20)及腺病毒介導(dǎo)的鼠白細(xì)胞介素10(Adenovirus vector-mediated murine interleukin，Ad-mIL-10)聯(lián)合干預(yù)對未發(fā)病非肥胖型糖尿病(Nonobese diabetic，NOD)小鼠胰島炎、胰島β細(xì)胞凋亡的影響和胰島β細(xì)胞的預(yù)防保護(hù)作用。
　　方法3～5周齡未發(fā)病雌性NOD小鼠24只，隨機(jī)分為①Anti-CD20組、②Anti-CD20+I

2、L-10組、③IL-10組和④生理鹽水對照（Normal control，NC）組。分別于第1d、第8d、第15d和第21d靜脈給予Anti-CD20、Anti-CD20+IL-10、IL-10和生理鹽水治療。定期監(jiān)測小鼠體質(zhì)量、尿糖及血糖，治療12w后麻醉下取小鼠血清測定Insulin、IL-10、CD20和CD19水平。分離胰腺行病理切片HE染色及免疫組化觀察胰島炎癥浸潤程度、TUNEL法觀察胰島β細(xì)胞凋亡情況和免疫組化檢測胰腺In

3、sulin、Caspase3、IL-10和CD20表達(dá)情況。Western Blot和RT-PCR方法檢測胰腺中Bcl-2、Caspase3和PDX-1蛋白和RNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果1.各組小鼠體質(zhì)量終值和治療后第4w、8w和12w小鼠隨機(jī)血糖組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。觀察結(jié)束時(shí)各組小鼠均未發(fā)病，且血糖維持在正常水平;
　　2.Anti-CD20和IL-10聯(lián)合治療可使血清中Insulin和IL-10水平

4、升高(vsAnti-CD20組、NC組，P=0.0002; vs IL-10組，P=0.01);各組血清CD20和CD19水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Anti-CD20、IL-10單獨(dú)治療組胰腺中Insulin、IL-10蛋白高表達(dá)，聯(lián)合治療組較單獨(dú)治療組Insulin、IL-10蛋白胰腺局部表達(dá)水平更高(P＜0.0001);
　　3.Anti-CD20組、IL-10組胰島炎積分（Anti-CD20組 vs NC組，P=0.00

5、29;IL-10組vs NC組，P=0.0066）、β細(xì)胞凋亡率（NC組vs Anti-CD20，P=0.0001;NC組vs IL-10組，P=0.001）均明顯低于NC組;而Anti-CD20+IL-10組胰島炎積分(P＜0.0001)、β細(xì)胞凋亡率（vs IL-10組、NC組，P＜0.0001;vs Anti-CD20組，P=0.001）顯著低于單獨(dú)治療組和NC組;
　　4.免疫組化結(jié)果顯示:Anti-CD20組、IL-10

6、組Caspase3蛋白低表達(dá)，Caspase3蛋白表達(dá)水平聯(lián)合治療組較IL-10組更低（P=0.0055）;聯(lián)合治療組與Anti-CD20組、IL-10組和NC組比較，CD20表達(dá)量顯著升高（vs IL-10組、NC組，P＜0.0001;vs Anti-CD20組，P=0.0004）。Western Blot和RT-PCR結(jié)果顯示:小鼠Anti-CD20+IL-10治療后，小鼠胰腺中Caspase3凋亡蛋白局部表達(dá)、蛋白定量和RNA定量

7、均顯著降低;胰腺中Bcl-2、PDX-1蛋白和RNA表達(dá)量均明顯高于單獨(dú)治療組和生理鹽水組，P＜0.01。
　　結(jié)論1.Anti-CD20+IL-10聯(lián)合干預(yù)維持動(dòng)態(tài)血糖和體質(zhì)量變化在正常范圍;
　　2.Anti-CD20、IL-10單獨(dú)干預(yù)可以減輕胰島炎癥程度，Anti-CD20+IL-10聯(lián)合治療使以上作用更加顯著;
　　3.Anti-CD20+IL-10聯(lián)合干預(yù)增加血清胰島素、IL-10水平和其在胰腺局部表達(dá)水平