2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河肈NA免疫和細(xì)胞加強(qiáng)方法制備抗人CD55分子單克隆抗體(Mab),并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行初步研究,確定該方法制備抗體的可行性。 實(shí)驗(yàn)方法:RT-PCR方法克隆CD55分子編碼區(qū)全長(zhǎng)基因,將擴(kuò)增基因定向?qū)胝婧吮磉_(dá)載體pcDNA3.1和原核表達(dá)載體pET28a中。誘導(dǎo)pET28a/55載體在大腸桿菌Rosseta中表達(dá)CD55,表達(dá)產(chǎn)物以包涵體形式存在。通過(guò)鹽酸胍變性溶解包涵體,并經(jīng)鎳柱純化得到重組CD55蛋白。重組質(zhì)粒

2、pcDNA3.1/55采用多次肌肉注射方法免疫小鼠,并在每次DNA免疫前對(duì)小鼠股四頭肌做預(yù)處理①DNA免疫前1周注射蛇毒心肌毒素;②DNA免疫前15分鐘注射25%的高滲蔗糖溶液。與細(xì)胞融合前3天,用高表達(dá)CD55分子HPB-ALL細(xì)胞加強(qiáng)免疫一次,之后采用傳統(tǒng)的淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備抗CD55分子單克隆抗體。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)每次免疫后小鼠血清中抗體分泌情況。應(yīng)用夾心ELISA方法檢測(cè)抗體的類(lèi)型,并利用抗體競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證制備抗體的表位

3、。通過(guò)流式細(xì)胞儀(FACS)、熒光顯微鏡驗(yàn)證抗體與天然細(xì)胞膜蛋白的結(jié)合活性和特異性;Westernblot印證抗體與變性線性蛋白結(jié)合活性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: (1)擴(kuò)增CD55全長(zhǎng)基因1174bp,構(gòu)建成pcDNA3.1/55重組質(zhì)粒。 (2)采用FACS檢測(cè)血清滴度,3次DNA免疫后其最高為1∶200,細(xì)胞加強(qiáng)后滴度最高為1∶800。 (3)通過(guò)細(xì)胞融合、篩選和克隆化培養(yǎng)最后得到兩株單克隆抗體分別為2B6E和

4、2B6B。 (4)兩株抗體IgG亞類(lèi)均為IgG2a,輕鏈均為為κ型。 (5)抗體免疫競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)表明2B6B、2B6E、IA10(BD)和67(Serotec)之間識(shí)別不同的抗原表位。 (6)FACS、免疫熒光顯微鏡和Westernblot實(shí)驗(yàn)表明抗體與天然細(xì)胞膜蛋白和變性膜蛋白及重組蛋白都有良好的結(jié)合活性和特異性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論:pcDNA3.1/55肌肉內(nèi)免疫后能激發(fā)小鼠產(chǎn)生針對(duì)CD55分子的抗體,聯(lián)合應(yīng)用細(xì)

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