用DNA免疫研制雞白細(xì)胞介素-2單克隆抗體.pdf

1、揚州大學(xué)碩士學(xué)位論文用DNA免疫研制雞白細(xì)胞介素2單克隆抗體姓名：提金鳳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：劉秀梵20050601Y748103提金風(fēng)：用DNA免疫研制雞白細(xì)胞介素2單寬隆抗體1用DNA免疫研制雞白細(xì)胞介素2單克隆抗體研究生：提金鳳導(dǎo)師：劉秀梵教授摘要雞白細(xì)胞介素2(IL2)是一種在機體免疫調(diào)節(jié)中具有多種功能的細(xì)胞因子，關(guān)于它的研究已成為免疫學(xué)研究的熱點之一。利用載體對IL2進(jìn)行體內(nèi)、體外表達(dá)，更是呈現(xiàn)出廣闊的發(fā)

2、展前景。目前，雞IL2的生物學(xué)鑒定主要依賴于ConA刺激的預(yù)激活T淋巴細(xì)胞以及由T淋巴細(xì)胞增殖實驗所決定的IL2的活性。然而，這些實驗費時、費力、敏感性低，而且受很多因素，如培養(yǎng)物、抑制因子以及其它生長因子的影響。因此為了有效的鑒定雞IL一2的表達(dá)、表達(dá)量及雞體內(nèi)IL一2的一些動態(tài)變化，我們迫切需要一種簡單、快速、敏感性高的檢測方式【5】。研制雞IL02單克隆抗體(簡稱單抗)將為我們以后建立一種快捷的檢測雞IL2的方式奠定基礎(chǔ)【201。

3、但商品化的雞IL一2很昂貴，其免疫原性弱，且常規(guī)法難以研制。因此我們采用真核表達(dá)質(zhì)粒作基因免疫，原核表達(dá)產(chǎn)物作篩選抗原的研究方案【捌。將雞IL2cDNA(本實驗室邵衛(wèi)星博士惠贈)，克隆入真核高效表達(dá)載體pcDNA31()中，構(gòu)建pcDNAIL2重組表達(dá)質(zhì)粒。經(jīng)PCR和雙酶切鑒定，克隆正確。同時構(gòu)建pcDNAILGFP重組表達(dá)質(zhì)粒(即GFP基因與IL2的一段上游基因融合表達(dá))，脂質(zhì)體法將其轉(zhuǎn)染COS1細(xì)胞，熒光顯微鏡下可觀察到特異性的綠色