Rho激酶在凝血酶誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活中作用的研究.pdf

1、目的：通過觀察凝血酶(Thrombin)、凝血酶抑制劑阿加曲班、Rho激酶抑制劑Y-27632對(duì)新生鼠皮層小膠質(zhì)細(xì)胞Rho激酶表達(dá)的影響以及其對(duì)于小膠質(zhì)細(xì)胞的激活作用，探討Rho激酶在凝血酶誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞激活中的作用機(jī)制。
　　 方法：1．將體外培養(yǎng)的新生SD大鼠(3天內(nèi))大腦皮層小膠質(zhì)細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組和凝血酶組，并按照凝血酶的不同濃度，又將凝血酶組分10U/ml,20U/ml，40U/ml,60U/ml四個(gè)亞組，作用6小時(shí)后

2、，應(yīng)用western-blot技術(shù)觀察不同組別小膠質(zhì)細(xì)胞Rho激酶的表達(dá)情況。2．將小膠質(zhì)細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組和凝血酶組(20U/ml)，并按照凝血酶(20U/ml)的不同作用時(shí)間隨機(jī)分為3小時(shí)，6小時(shí)，12小時(shí)，24小時(shí)四個(gè)亞組，應(yīng)用western-blot技術(shù)觀察不同組別小膠質(zhì)細(xì)胞Rho激酶的表達(dá)情況。3．將小膠質(zhì)細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組和凝血酶(20U/ml，24小時(shí))組，然后按照同濃度、同時(shí)間(20U/ml，24小時(shí))的實(shí)驗(yàn)條件，將凝血

3、酶組分為Thrombin、阿加曲班、Y-27632三個(gè)亞組，其中阿加曲班、Y-27632組分別為阿加曲班和Y-27632預(yù)處理半小時(shí)后再與凝血酶共孵育24小時(shí)，然后用免疫熒光和western-blot技術(shù)觀察不同組別小膠質(zhì)細(xì)胞Rho激酶的表達(dá)情況，通過顯微鏡觀察小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)，硝酸還原酶法和ELISA法檢測(cè)各組培養(yǎng)基中一氧化氮(NO)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達(dá)情況，以激光共聚焦，中性紅吞噬實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞的吞噬能力。將以

4、上結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：1．與對(duì)照組相比，不同濃度凝血酶與小膠質(zhì)細(xì)胞共孵育后，濃度在20U/ml時(shí)，小膠質(zhì)細(xì)胞Rho激酶表達(dá)顯著增加(P＜0.05)。2．與對(duì)照組相比，凝血酶在作用24小時(shí)后，小膠質(zhì)細(xì)胞Rho激酶表達(dá)顯著增加(P＜0.05)。3．與對(duì)照組相比，凝血酶在濃度20U/ml，作用24小時(shí)時(shí)，Rho激酶表達(dá)顯著增加且NO和TNF-α的表達(dá)量顯著增加(P＜0.05)，吞噬能力增強(qiáng)(P＜0.05)；與凝血酶組(2