活化蛋白C在脂多糖誘導的小膠質(zhì)細胞炎癥中的作用及其機制.pdf

1、背景和目的：宮內(nèi)感染（intrauterine infection）是引起早產(chǎn)兒（preterm birth）的重要病因，也常常引發(fā)一系列神經(jīng)系統(tǒng)的不良結(jié)局如早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷（white matter injury)。早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷的重要病理特點為彌漫性的小膠質(zhì)細胞活化，少突膠質(zhì)細胞及其前體細胞發(fā)育不良從而導致患兒出現(xiàn)運動障礙，認知、知覺及行為異常等嚴重神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥?；罨鞍證（activated protein C）為存在于血漿中

2、的維生素K依賴性的胰島素樣絲氨酸蛋白酶，除了其重要的抗凝功能外，近年的各種研究表明其具有確切的抗炎、抗凋亡及保護內(nèi)皮屏障的功能。因此我們推測活化蛋白C可以某種調(diào)節(jié)機制作用于活化的小膠質(zhì)細胞，下調(diào)其炎性因子的表達從而減輕宮內(nèi)感染引起的腦白質(zhì)損傷。
　　方法：將SPF級別的出生后24小時內(nèi)的SD乳鼠斷頭取腦，進行小膠質(zhì)細胞的原代培養(yǎng)。分離純化后的小膠質(zhì)細胞利用免疫熒光雙標法進行純度鑒定，達到95％以上可進行后續(xù)實驗。純化后恢復靜息態(tài)的

3、小膠質(zhì)細胞分為2組，測定APC、PAR-1°的安全濃度范圍。小膠質(zhì)細胞分為6組予以不同的處理：對照組、LPS組、LPS+APC組、LPS+APC+PAR-1°組、APC組、PAR-1°組，用ELISA法檢測各組上清中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達；用Griess法檢測各組上清中NO的表達；用免疫熒光染色顯示各組NF-кB、磷酸化p38-MAPK、的表達變化；用TUNEL染色顯示各組細胞的凋亡情況。
　　結(jié)果：成功培

4、養(yǎng)并獲得高純度的原代小膠質(zhì)細胞；APC可以明顯降低LPS誘導的小膠質(zhì)細胞炎性分子（TNF-α、IL-1β、IL-6、NO）的表達（p＜0.01、p＜0.05、p＜0.05、p＜0.01），在使用PAR-1°阻斷蛋白激酶活化受體1后，APC的抗炎作用有所減弱，但無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）；免疫熒光顯示LPS+APC組NF-кB、磷酸化p38-MAPK、表達較LPS刺激組降低，給予PAR-1°阻斷后NF-кB、磷酸化p38-MAPK、表達