力達(dá)霉素聯(lián)合利妥昔單抗治療人B細(xì)胞淋巴瘤的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:力達(dá)霉素是一種烯二炔類抗腫瘤抗生素，它對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有強(qiáng)烈的殺傷作用。利妥昔是一種用于治療惡性腫瘤的單克隆抗體藥物，適應(yīng)癥為B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤。研究表明，利妥昔單抗與化療藥物、力達(dá)霉素聯(lián)合多種化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞均有較好的協(xié)同效果。本研究主要探討力達(dá)霉素與利妥昔單抗聯(lián)合抗人B細(xì)胞淋巴瘤的作用和機(jī)制。
　　方法:以人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株Raji和Ramos為模型，通過(guò)MTS法研究力達(dá)霉素、利妥昔單抗以及聯(lián)合方案對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑

2、制作用。PI染色后用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布的變化。采用Annexin V-FITC/PI法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡比率。Western Blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白以及相關(guān)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)量變化。最后用人B細(xì)胞淋巴瘤裸鼠模型驗(yàn)證該聯(lián)合方案對(duì)淋巴瘤的體內(nèi)抑制作用。
　　結(jié)果:利妥昔單抗在體外單獨(dú)處理Raji和Ramos細(xì)胞48h，結(jié)果其抑制率較低，且沒有劑量依賴性。利妥昔單抗與力達(dá)霉素同時(shí)聯(lián)合處理Raji和Ramos細(xì)胞48h，聯(lián)合效果不明

3、顯。利妥昔單抗預(yù)處理細(xì)胞48h后，再與力達(dá)霉素聯(lián)合處理的方案各組聯(lián)合效果較好，有兩種濃度的聯(lián)合方案增效指數(shù)小于0.7。流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布，結(jié)果顯示作用24h后，預(yù)處理聯(lián)合方案各組與力達(dá)霉素單藥組相比，單藥組有更顯著的G2/M阻滯;而聯(lián)合方案各組G2/M阻滯降低并有一定的G1阻滯。流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡比率發(fā)現(xiàn)，預(yù)處理聯(lián)合方案組的細(xì)胞凋亡比率顯著多于力達(dá)霉素單藥組。Western Blot結(jié)果顯示，相比力達(dá)霉素單藥組，預(yù)處理聯(lián)合組

4、明顯誘導(dǎo)Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9和PARP的剪切形式的升高，而凋亡抑制作用的cIAP-2和Bcl-2表達(dá)降低。pEGFP-N1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Ramos細(xì)胞篩選得到穩(wěn)定細(xì)胞株后，尾靜脈接種BALB/c小鼠并加藥處理，結(jié)果顯示，聯(lián)合處理組小鼠生存時(shí)間明顯高于對(duì)照組和單藥組;小動(dòng)物活體成像分析顯示，相比對(duì)照組、利妥昔單抗單藥組和力達(dá)霉素單藥組，預(yù)處理聯(lián)合組小鼠腫瘤的脾和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移富集程度明顯降低。
　　結(jié)論: