Akt抑制劑聯(lián)合利妥昔單抗靶向治療伯基特淋巴瘤的實驗研究.pdf

1、目的：探討Akt抑制劑（AZD5363）聯(lián)合利妥昔單抗在體外對伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma，BL）增殖和凋亡的影響，并對相關的機制進行探討，為臨床采用利妥昔單抗聯(lián)合Akt抑制劑靶向治療BL提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)人Daudi細胞,采用CCK8法檢測不同濃度AZD5363、利妥昔單抗作用24h對Daudi細胞增殖的影響。
　　2.選取AZD536340μmol/L及利妥昔單抗50μg

2、/mL做進一步研究,實驗分4組:陰性組、AZD5363組、利妥昔單抗組、聯(lián)合用藥組(AZD5363+利妥昔單抗)，CCK8法檢測24、48、72小時后Daudi細胞的增殖情況及流式細胞術檢測48、72小時后Daudi細胞的凋亡情況。
　　3.選取AZD536340μmol/L及利妥昔單抗50μg/mL做進一步研究,實驗分4組:陰性組、AZD5363組、利妥昔單抗組、聯(lián)合用藥組(AZD5363+利妥昔單抗)，Western blot

3、（WB）方法檢測24h后Daudi細胞磷酸化Akt（phosphorate-Akt，p-Akt)和總Akt(total—Akt，T-Akt)蛋白的表達情況。
　　4.用SPSS19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。
　　結果：
　　1、濃度為25、50、75、100ug/mL的利妥昔單抗作用于Daudi細胞24h后對應的抑制率分別為16.35％、18.15%、21.89、24.36%，顯示利妥昔單抗在體外對Daudi細胞表現(xiàn)出較弱

4、的增殖抑制作用。
　　2、濃度為5、10、20、40及80μmol/L的AZD5363作用于Daudi細胞24h后對應的抑制率分別為5.61%、13.42%、18.02%、21.32%、55.23%，在一定的濃度范圍內(nèi)，隨著AZD5363的濃度加大，其抑制率增加。
　　3、聯(lián)合用藥組在24、48、72h時間點對Daudi細胞增殖抑制率分別為35.13%、44.73%、71.33%，顯著高于AZD5363組及利妥昔單抗組，差異

5、均具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　4、聯(lián)合作用組作用于Daudi細胞48小時后凋亡率為47.21%，顯著高于AZD5363組（29.17%）及利妥昔單抗組（19.96%）；聯(lián)合作用組作用于Da udi細胞72小時后凋亡率為65.23%，顯著高于AZD5363組（40.70%）及利妥昔單抗組（22.61%），差異均具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　5、AZD5363組、利妥昔單抗組及聯(lián)合用藥組Daudi細胞T-Akt

6、表達無顯著的差異（p>0.05）；聯(lián)合用藥組Daudi細胞p-Akt表達明顯下調(diào)（0.18±0.04），并顯著低于AZD5363組（0.33±0.03）及利妥昔單抗組（0.45±0.04），差異均具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　結論：利妥昔單抗對BL細胞的增殖和凋亡影響較弱；Akt抑制劑AZD5363具有較強的抑制BL細胞增殖、促使細胞凋亡的作用，當其與利妥昔單抗聯(lián)合應用后，療效優(yōu)于單藥；其作用機制與Akt蛋白磷酸化水平下調(diào)