西妥昔單抗對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞的作用.pdf

1、背景和目的:
　　流行于我國(guó)南方的鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)分化程度低,易發(fā)生轉(zhuǎn)移。以順鉑(cisplatin,DDP)為主的聯(lián)合化療是目前治療局部晚期或復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移鼻咽癌的主要方案,同期放化療較單純放療明顯提高局部晚期鼻咽癌治愈率,姑息性化療能延長(zhǎng)晚期鼻咽癌患者的生存期。但是順鉑方案的毒副反應(yīng)大,限制其劑量強(qiáng)度的提高。而且鼻咽癌細(xì)胞對(duì)順鉑等化療藥物產(chǎn)生原發(fā)或繼發(fā)性耐藥、進(jìn)一步發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致

2、鼻咽癌患者死亡的重要原因。生物靶向藥物與傳統(tǒng)的治療模式相結(jié)合是目前探索進(jìn)一步提高進(jìn)展期鼻咽癌療效的路徑之一。研究表明包括鼻咽癌在內(nèi)的許多上皮源性惡性腫瘤高表達(dá)表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR),特異性靶向EGFR的單克隆抗體——西妥昔單抗(Cetuximab,C225)與放療聯(lián)合治療局部晚期頭頸部癌起顯著的放射增敏、協(xié)同效應(yīng),而C225與化療聯(lián)合治療含鉑方案化療失敗的進(jìn)展期鼻咽

3、癌的臨床研究結(jié)果還存在爭(zhēng)議。本實(shí)驗(yàn)中我們分析C225以不同序貫方式聯(lián)合DDP作用人鼻咽癌HNE1親代和順鉑耐藥細(xì)胞株HNE1/CDDP的療效,并探討C225對(duì)鼻咽癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力以及對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞在低生長(zhǎng)因子人工基質(zhì)(growth factor reduced matrigel,GFR-matrigel)上形成小管樣結(jié)構(gòu)的影響。
　　方法:
　　以人鼻咽癌HNE1親代和能穩(wěn)定生長(zhǎng)于1μg/ml順鉑的耐藥細(xì)胞株HNE1/CDDP,以

4、及人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株CRL-2480(HUVEC-12)作為研究對(duì)象。第一部分:1、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)HNE1和HNE1/CDDP細(xì)胞EGFR的表達(dá);2、采用MTT法和克隆形成法檢測(cè)C225單藥或與DDP聯(lián)合對(duì)HNE1和HNE1/CDDP細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用,并分析聯(lián)合用藥的效應(yīng)。第二部分:1、MTT法、Transwell侵襲小室和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn),分別測(cè)定C225對(duì)HNE1和HNE1/CDDP細(xì)胞與人工基質(zhì)(matrigel)的粘附能力

5、、侵襲能力和遷移能力的影響;2、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)CRL-2480細(xì)胞EGFR的表達(dá)情況;3、小管樣結(jié)構(gòu)形成實(shí)驗(yàn),了解C225對(duì)CRL-2480細(xì)胞在GFR-matrigel上形成小管樣結(jié)構(gòu)直接和間接的影響。
　　結(jié)果:
　　第一部分:
　　1、HNE1和HNE1/CDDP細(xì)胞均高表達(dá)EGFR。
　　2、C225對(duì)HNE1和HNE1/CDDP細(xì)胞均有生長(zhǎng)抑制作用。但在1~200μg/ml范圍內(nèi),C225對(duì)細(xì)胞

6、的生長(zhǎng)抑制作用不呈劑量依賴性;對(duì)HNE1和HNE1/CDDP細(xì)胞的最大生長(zhǎng)抑率分別為:(28.17±3.47)％和(17.65±1.73)%;C225對(duì)HNE1的生長(zhǎng)抑制作用比對(duì)HNE1/CDDP的生長(zhǎng)抑制作用較大。
　　3、10或80μg/ml C225與不同濃度的DDP聯(lián)合作用HNE1和HNE1/CDDP細(xì)胞,無(wú)論先C225后DDP還是先DDP后C225的序貫聯(lián)合用藥方式,C225聯(lián)合低于或接近IC50濃度的DDP時(shí)均呈現(xiàn)相加

7、作用;C225聯(lián)合遠(yuǎn)超過(guò)IC50濃度的DDP時(shí)則表現(xiàn)為次于相加作用。
　　第二部分:
　　1、在 C225作用下,HNE1和HNE1/CDDP細(xì)胞在matrigel上的粘附數(shù)量減少,與對(duì)照組比較差異有顯著性(P值均<0.05)。C225使HNE1和HNE1/CDDP的侵襲細(xì)胞數(shù)減少,與對(duì)照組比較差異有顯著性(P值均<0.01)。C225使HNE1和HNE1/CDDP細(xì)胞向損傷區(qū)遷移的距離減少,與對(duì)照組比較差異有顯著性(P值均

8、<0.05)。
　　2、CRL-2480細(xì)胞表達(dá)EGFR。
　　3、C225使CRL-248O細(xì)胞在GFR-matrigel上形成小管的長(zhǎng)度明顯縮短,對(duì)照組小管長(zhǎng)度390±20μm,C225直接作用組小管長(zhǎng)度341±15μm(t=5.567, P=0.000)。C225通過(guò)影響HNE1分泌對(duì)小管形成的間接作用不明顯(t=1.602, P=0.14)。
　　結(jié)論:
　　1、HNE1、HNE1/CDDP和CRL-24

9、80細(xì)胞均高表達(dá)EGFR。
　　2、C225單藥對(duì)HNE1和HNE1/CDDP的生長(zhǎng)有較溫和的抑制作用。
　　3、C225聯(lián)合低于或接近IC50濃度的DDP時(shí)均呈現(xiàn)相加作用;C225聯(lián)合遠(yuǎn)超過(guò)IC50的DDP時(shí)則表現(xiàn)為次于相加作用。聯(lián)合用藥的效應(yīng)不受序貫用藥的順序影響。C225不能逆轉(zhuǎn)HNE1/CDDP細(xì)胞對(duì)DDP耐藥。
　　4、C225能減弱HNE1和HNE2/CDDP細(xì)胞對(duì)matrigel的粘附、侵襲能力和遷移能力