纖溶酶對(duì)后發(fā)性白內(nèi)障抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：隨著顯微手術(shù)技術(shù)及設(shè)備的不斷完善，現(xiàn)代白內(nèi)障囊外摘除術(shù)的許多并發(fā)癥已經(jīng)明顯減少，后發(fā)性白內(nèi)障(AC)又稱(chēng)后囊膜混濁(PCO)已經(jīng)成為這一手術(shù)最常見(jiàn)和最嚴(yán)重的并發(fā)癥，嚴(yán)重影響白內(nèi)障患者術(shù)后遠(yuǎn)期視力的恢復(fù)。因此，如何有效的預(yù)防PCO的形成已經(jīng)成為迫切需要眼科學(xué)者解決的問(wèn)題。迄今為止，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。近年來(lái)的研究表明，堿性成纖維生長(zhǎng)因子（bFGF）和纖維蛋白是參與PCO的形成的主要因子。纖溶酶通過(guò)對(duì)纖維蛋白的特異性降解從而誘導(dǎo)玻

2、璃體后脫離，但是，其在PCO中的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)新西蘭大白兔行白內(nèi)障囊外摘除術(shù)制造PCO動(dòng)物模型。應(yīng)用裂隙燈觀察前房炎癥反應(yīng)、PCO的形成過(guò)程；應(yīng)用光鏡觀察后囊膜上的晶狀體上皮細(xì)胞(LECs)的形態(tài)以及纖溶酶對(duì)角膜、視網(wǎng)膜的影響；應(yīng)用免疫組化半定量檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)在后囊膜上LECs的表達(dá)情況；應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)術(shù)后房水中bFGF的含量。為探討纖溶酶對(duì)PCO形成的抑制作用的機(jī)制以及其在臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)

3、驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：清潔級(jí)健康4月齡新西蘭大白兔20只，體重2.5-3.0kg，無(wú)眼部疾病。隨機(jī)分成兩組，即對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。兩組均在全身麻醉下行白內(nèi)障囊外摘除術(shù)，術(shù)后對(duì)照組不給予任何處理，實(shí)驗(yàn)組給予5IU/ml纖溶酶0.2ml前房注射。術(shù)后給予妥布霉素/地塞米松眼水點(diǎn)眼6/日，一周后改為4/日，點(diǎn)三周停藥。術(shù)后1天、3天、1周、2周、2個(gè)月進(jìn)行眼部裂隙燈檢查，觀察并記錄PCO的發(fā)生時(shí)間、程度、部位、形態(tài)及前房炎癥反應(yīng)和眼壓，并

4、抽取房水0.2ml采用ELISA技術(shù)以檢測(cè)前房?jī)?nèi)bFGF的含量，2個(gè)月后空氣栓塞處死并摘除眼球，將其固定于4％多聚甲醛溶液1周，石蠟包埋制成組織切片，HE染色，光鏡下觀察后囊膜上的LECs的形態(tài)以及纖溶酶對(duì)角膜、視網(wǎng)膜的影響；光鏡下觀察經(jīng)免疫組化染色后增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)在后囊膜上LECs的表達(dá)情況。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、前房炎癥：白內(nèi)障術(shù)后第1天兩組所有術(shù)眼出現(xiàn)不

5、同程度的前房炎癥反應(yīng)；術(shù)后第3天實(shí)驗(yàn)組有14眼仍存在前房炎癥反應(yīng)，對(duì)照組有19眼，實(shí)驗(yàn)組發(fā)生率較對(duì)照組低；術(shù)后1周所有術(shù)眼前房炎癥反應(yīng)消失，對(duì)照組仍有6眼存在前房炎癥反應(yīng)；術(shù)后2周對(duì)照組所有術(shù)眼前房炎癥反應(yīng)消失。兩組前房炎癥反應(yīng)消退時(shí)間：實(shí)驗(yàn)組為5.80±1.88天；對(duì)照組為8.90±3.53天，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異。
　　 2、術(shù)前、后眼內(nèi)壓的變化分析：實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照眼術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)眼壓值之間無(wú)顯著性差異，而手術(shù)前后不同時(shí)間點(diǎn)有

6、差異，術(shù)前平均眼壓值為23.46±2.46mmHg，與術(shù)后第1、3天的平均眼壓值32.13±3.55mmHg、26.67±2.79mmHg相比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異，而與術(shù)后第1、2、4周平均眼壓值24.98±2.80mmHg、23.39±2.82mmHg、22.63±2.75mmHg相比較，無(wú)顯著性差異。
　　 3、PCO的裂隙燈照相：實(shí)驗(yàn)組在術(shù)后2周開(kāi)始出現(xiàn)PCO;對(duì)照組術(shù)后1周開(kāi)始出現(xiàn)PCO。術(shù)后2個(gè)月時(shí)PCO發(fā)生率：實(shí)

7、驗(yàn)組：Ⅰ級(jí)5眼，Ⅱ級(jí)4眼，11眼未出現(xiàn)PCO;對(duì)照組：Ⅰ級(jí)7眼，Ⅱ級(jí)5眼，Ⅲ級(jí)6眼，2眼未出現(xiàn)PCO。PCO的發(fā)生率：實(shí)驗(yàn)組為45％，對(duì)照組為90％，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異，在PCO發(fā)生的時(shí)間上：實(shí)驗(yàn)組平均為＞2月；對(duì)照組平均為1月，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異;PCO的混濁程度評(píng)分：實(shí)驗(yàn)組為0.65±0.81、對(duì)照組為：1.75±1.02，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異。
　　 4、組織病理組織學(xué)：①后囊膜H染色：實(shí)驗(yàn)組中央?yún)^(qū)后囊膜上LECs稀少

8、，呈單層排列。對(duì)照組中央?yún)^(qū)和赤道部后囊膜上均可見(jiàn)多層增生的LECs以及大量的膠原纖維附著；角膜HE染色：兩組角膜各層結(jié)構(gòu)基本完整，可見(jiàn)散在內(nèi)皮細(xì)胞脫落；視網(wǎng)膜HE染色：兩組視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)完整，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大小一致，輪廓規(guī)則，細(xì)胞邊界清晰。②免疫組化染色：細(xì)胞核染色為棕黃色黃褐色為陽(yáng)性結(jié)果。實(shí)驗(yàn)組后囊膜可見(jiàn)單層著色，對(duì)照組后囊膜可見(jiàn)多層細(xì)胞染色。實(shí)驗(yàn)組IOD值平均為31.7±3.8，對(duì)照組IOD值平均為61.3±4.0，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異

9、。
　　 5、ELISA法測(cè)定前房房水中bFGF的含量：術(shù)后第1天、3天、7天、2周和1月，實(shí)驗(yàn)組前房?jī)?nèi)的含量為0.78±0.19ng/ml、0.38±0.12ng/ml、0.68±0.21ng/ml、0.81±0.31ng/ml、0.93±0.21ng/ml，對(duì)照組前房?jī)?nèi)bFGF的含量為15.88±1.38ng/ml、14.34±1.21ng/ml、9.13±1.25ng/ml、4.87±0.76ng/ml、2.75±1.01