松花粉對(duì)幾種脂肪代謝酶抑制作用的研究.pdf

1、馬尾松花粉中富含人體所需的多種營(yíng)養(yǎng)成分和酶、黃酮、核酸等生命活性物質(zhì),具有利尿,輕身,潤(rùn)心肺,除風(fēng)濕等方面的作用.本文以馬尾松花粉為原料,對(duì)馬尾松花粉中的脂肪酶的最適反應(yīng)條件進(jìn)行測(cè)定;對(duì)松花粉進(jìn)行水提及醇提分離純化,得到的提取物分別作用于脂肪酶、脂肪酸合成酶及肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶,得到如下的結(jié)論:
　　1.馬尾松花粉中脂肪酶最適反應(yīng)條件的測(cè)定
　　為研究松花粉中脂肪酶的最適反應(yīng)條件,考察了溫度(℃)、pH、底物、金屬離子等因素對(duì)

2、其酶活的影響.通過(guò)脂肪酶的催化水解作用,用95％乙醇終止反應(yīng),測(cè)定其酸價(jià),進(jìn)而求得酶活,選擇出脂肪酶的最適反應(yīng)條件.結(jié)果表明,最佳反應(yīng)條件為:溫度35℃,pH7.4,底物為三丁酸甘油酯,Ca2+、Fe3+、Mg2+、Fe2+會(huì)提高脂肪酶活力.
　　2.松花粉提取物對(duì)脂肪酶活的影響
　　以0.1mg/mL的奧利司他為陽(yáng)性對(duì)照物,用三蒸水配制濃度為0、10、30、70、150、250(已比較難溶)mg/mL的松花粉水提物作用于脂

3、肪酶,除在70mg/mL時(shí)表現(xiàn)出對(duì)脂肪酶活輕微的抑制作用外,花粉水提物對(duì)胰脂酶酶活基本無(wú)影響;以0.1mg/mL的奧利司他為陽(yáng)性對(duì)照物,分別配制0、1、5、10、20、40mg/mL濃度的松花粉醇提物(DMSO溶解)溶液,進(jìn)行酶活測(cè)定實(shí)驗(yàn),與對(duì)照相比,松花粉醇提物對(duì)脂肪酶表現(xiàn)出抑制作用:在10mg/mL時(shí)抑制作用已相當(dāng)明顯,其半抑制常數(shù)為4.4mg/mL.測(cè)定不同加樣順序?qū)γ富畹挠绊?結(jié)果表明酶是先與抑制劑結(jié)合,從而阻止了酶與底物的結(jié)合

4、,從而起到抑制作用的.通過(guò)對(duì)Lineweaver-Burk雙倒數(shù)圖和Dixon圖的特征分析,表明松花粉醇提物對(duì)脂肪酶的抑制屬于非競(jìng)爭(zhēng)性抑制.求得松花粉醇提物的抑制劑常數(shù)為Ki=0.02,表明該抑制劑與酶的結(jié)合物很穩(wěn)定.
　　松花粉醇提物經(jīng)離心,得沉淀與上清兩種組分,經(jīng)酶活測(cè)定得知上清對(duì)脂肪酶具有抑制作用;上清中加入石油醚,得到兩種組分,橙黃色透明液體A1與黃褐色固體 A2,對(duì)上清進(jìn)行懸蒸濃縮得到油狀液體.經(jīng)酶活測(cè)定得知兩種物質(zhì)均對(duì)

5、脂肪酶有抑制作用,但是A2顏色較深,對(duì)滴定結(jié)果有影響,故下面對(duì)A1進(jìn)行分離純化;波長(zhǎng)241.00nm,流動(dòng)相:34％乙醚:66％正己烷,對(duì)A1進(jìn)行中壓柱層析分離,共出現(xiàn)了六個(gè)峰,其中峰二、峰三與峰五比較明顯.但峰一、峰二、峰三與峰四相離太近,分離的效果不是很好,故收集時(shí)將峰一、峰二與峰三收集在一起,稱(chēng)作組分B1,將峰五與峰六收集在一起,稱(chēng)為組分B2,通過(guò)甲醇沖柱,得到組分B3.組分B1、B2、B3進(jìn)行脂肪酶活性分析,得出組分B1、B2、

6、B3均對(duì)脂肪酶活具有抑制作用;乙醚:正己烷=1:9時(shí),將組分B1進(jìn)行中壓柱層析,將峰一、峰二與峰三收集在一起,稱(chēng)為組分C1,峰四收集到的組分稱(chēng)為組分C2.對(duì)C1與C2進(jìn)行酶活測(cè)定,組分C1與C2都對(duì)脂肪酶活具有抑制作用,但C1的抑制效果要好于C2;通過(guò)組分 C1與 C2的高效液相色譜(HPLC)分析,得出 C1與C2都是一很雜的混合物.
　　3松花粉提取物對(duì)脂肪酸合成酶活的影響
　　從大鼠肝臟中提取脂肪酸合成酶,測(cè)得酶比活為

7、2.1U/mg.選取質(zhì)量濃度為100μg/mL的松花粉水提物與醇提物作用于脂肪酸合成酶,通過(guò)與水空白及陽(yáng)性對(duì)照C75相比,松花粉水提物表現(xiàn)出對(duì)FAS顯著的抑制作用,而醇提物則對(duì)FAS具有促進(jìn)作用.
　　4松花粉提取物對(duì)肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(CPT-1)活的影響
　　大鼠心臟取血,離心后得血清,測(cè)得CPT-1的酶活為72.06IU/mL.選取質(zhì)量濃度為100mg/mL的松花粉水提物與醇提物作用于CPT-1,通過(guò)與空白及陽(yáng)性對(duì)照相比